饲料霉菌毒素的种类及其检测方法研究

试验研究　饲料霉菌毒素的种类及其检测方法研究　余海芬，陶　军，殷方芝，黄　忠，战　涛　（上海市嘉定区农业技术推广服务中心，上海嘉定２０１８００）　摘要：畜禽饲料受霉菌毒素污染在我国十分普遍，造成的危害巨大。加强饲料中霉菌毒素的监测关系到整个饲料产　业及养殖业的健康发展。本文介绍了近年来监测到的畜禽饲料中主要霉菌毒素的种类，并就其检测方法进行了综述。　关键词：霉菌毒素；危害；检测方法　ＤＯ１：１０．３９６９／Ｊ．ＩＳＳＮ．１６７１—６０２７．２０１５．０８．０１８　霉菌毒素几乎存在于所有的饲料原料和人类食品原料　中，其造成的危害是一个全球性的问题。饲料中的霉菌毒素　能直接引起动物病理或生理变化，还常常容易与其他疾病产　生混淆，被养殖者忽略，因此给畜禽养殖业及饲料工业的发　展带来严重危害。据估计，全球每年有２５％的谷类作物会受　到霉菌毒素的污染，造成的经济损失达到几百亿美元。　最近几年，随着原料价格的不断攀升，粮食副产物被大　量使用，使得饲料中霉菌毒素含量成倍增长。人们对霉菌毒　素所带来的危害也越来越重视，针对霉菌毒素的检测技术也　在逐步发展。本文综述了几种饲料中常见霉菌毒素的种类及　其危害，并就各种新旧检测方法的发展进行了讨论。　１　饲料中霉菌毒素的种类及危害　１．１饲料中常见霉菌毒素的种类　在饲料原料中残留的霉菌毒素大约有３０多种，其中最　为常见的有黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、赭曲霉毒　素、伏马毒素、Ｔ一２毒素等。　王金勇等在２０１２年、２０１３年连续对中国饲料和原料霉　菌毒素进行监测，共检测来自全国各地的包括猪料、禽料、奶　牛精料、水产料、饼粕、豆粕等饲料样品１５００余份。检测结果　显示：猪料、禽料中最常见的霉菌毒素为呕吐毒素、伏马毒素　和玉米赤霉烯酮，阳性检出率超过５０％，其中呕吐毒素和伏　马毒素甚至超过８０％～９０％；黄曲霉毒素和赭曲霉毒素在猪　禽料中阳性检出率较低。奶牛精料中同样呕吐毒素、伏马毒　素和玉米赤霉烯酮的出现频率较高。不同水产品种对霉菌毒　素耐受差异很大，因此几种毒素都应该加强防控。另外，受黄　曲霉毒素污染的原料主要出现在棉籽、棉粕、花生粕，玉米及　玉米副产品饲料中。　１．２几种霉茵毒素对动物的危害　霉菌毒素会对动物机体产生很强的毒副作用，即使在饲　料原料中含量很低，也会引起动物出现生长受阻、免疫机能　下降、繁殖性能降低等现象。饲料原料中往往多种霉菌毒素　同时存在，不同霉菌毒素间还会产生协同作用，对动物的危　害将加剧。表１列举了几种饲料中常见霉菌毒素对动物的危　害。　２饲料中霉菌毒素的检测方法　・・ａ翟鍪蟊豳・・　２．１确　联免疫法　该方法特异性强、灵敏度高，操作步骤简单、检测时间　短，无需贵重仪器设备，对样品的纯度要求不高，适用于大批　量样品集中检测。且在操作过程中安全性高、污染少，毒素标　准品的浓度可以很低，减少了对检测人员和环境的潜在危害　和污染。其中黄曲霉毒素Ｂ１、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素Ａ、　呕吐毒素都已建立了单克隆抗体酶联免疫检测的国标方法，　可用于ｆ夹速筛选。几种常见霉菌毒素也有相应的商品化试剂　盒销售，技术比较成熟。　２．２薄层色谱法　薄层色谱法（ＴＬＣ）是我国测定饲料中霉菌毒素的仲裁方　法之一。该方法设备简单，易于普及，但样品前处理比较繁　琐，分离效率低、灵敏度稍差，目前已很少使用。然而，在发现　确证新毒素、快速监测方法建立，毒素分析方法研究等方面，　尤其是当实验条件有限时，薄层色谱还是有一定优越性的。　２．３色谱法　液相色谱法（ＨＰＬＣ）是近几年发展起来的检测霉菌毒素　方法，主要是用荧光检测器检测，该法快速准确，纯化效果　好，其方法适用性、分离效率和灵敏度方面是其他方法无法　替代的。气相色谱法（ＧＣ）从２０世纪７０年代开始用于霉菌　毒素检测，气相色谱法近年来也被应用到高风险的饲料霉变　污染的检测中，但是它不及液相色谱法廉价与陕速。　２．４质谱法　质谱法是霉菌毒素检测领域最准确可靠的检测方法，如　液相色谱一质谱联用法，但此法检测速度较慢，适用于定性　检测与实验室研究。随着科技的发展，后来又出现了一些基　于质谱技术的快速检测方法，如基质辅助激光解析电离一质　谱联用法、离子迁移光谱法、常规环境电离质谱法等。随着读　取定量质的手持设备已经商业化生产，这种成本低廉，可进　行现场操作的检测方法应用前景可观，饲料厂可用其对原料　中霉菌毒素含量进行常规监测。　３小结　大量研究和生产实践证明，霉菌毒素可以使畜禽等产生　多种难以判断的综合病症，并能通过动物肉、蛋、奶、内脏进　入人类的食品链中，危害人类健康。中国尤其是南方，由于自　２０１５年第０，９期　试验研究　表１　饲料中霉菌毒素对动物的危害　然条件等原因，霉菌毒素污染导致的问题相当严重。因此，重　视霉菌毒素检测是非常迫切的问题，越早进行霉菌毒素检测　就越能将危害降到最低。饲料作为霉菌毒素产生的源头更应　『４］王敬．霉菌毒素对猪危害及其防控的研究进展　养殖技术顾问，　２０１４，２：２３２—２３３．　［５］冯艳忠，等．霉菌毒素的研究进展ｆＪＪ．饲料丁＝业，２０１４，３５（４）：５８—６１．　该及时通过检测发现问题，尽早采取合理措施控制毒素生　长，以免给养殖业带来更大的危害。　参考文献　【ｌ】Ｍａｋｕｎ　Ｈ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｆｕｎｇｉ　ａｎｄ　ｓｏｍｅ　ｍｙｃｏｔｏｘｉｎｓ　ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｎｇ　ｒｉｃｅ　（Ｏｒｙｚａ　ｓａｔｉｖａ）ｉｎ　Ｎｉｇｅｒ　Ｓｔａｔｅ，Ｎｉｇｅｒｉａ［Ｊ］．Ａｆｒｉｃａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｔｅｅｈｎｏｌｏｇｙ，２００７．６（２）．　【６］张华，等．饲料中霉菌和霉菌毒素的检测方法『Ｊ］．贵州农业科学，　２００４，３２（５）：８６—８７．　［７］应永飞，等．液相色谱——串联质谱法测定饲料中ｌ４种霉菌毒素　及其类似物【ＪＪ．分析化学，２０１０，３８（１２）：１７５９—１７６４．　［８］Ｅｌｏｓｔａ　Ｓ，ｅｔ　ａＬ　ＭＡＬＤＩ　ＴＯＦ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　ｏｆ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｍｙｃｏｔｏｘｉｎｓ　ｉｎ　ｂ￣ｌｅｙ［Ｊ］．Ｊ　Ａｐｐｌ　Ｂｉｏｍｅｄ，２００７（５）：３９—４７．　［２】王金勇；等．２０１３年中国饲料和原料霉菌毒素检测报告ＩＪ】．国外畜　【９】Ｓｈｅｉｂｍｆｉ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｆｌａｔｏｘｉｎｓ　Ｂ　１　ａｎｄ　Ｂ２　ｕｓｉｎｇ　ｉｏｎ　ｍｏｂｉｌｉｔｙ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］．Ｔａｌａｎｔａ，２００８，７５（１）：２３３—２３８．　［１０］Ｃｏｏｋｓ　Ｒ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ａｍｂｉｅｎｔ　ｉｉｌａ．ｑｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，　２００６．３１１（５７６７）：１５６６－１５７０．　牧学（猪与禽），２０１４，３４（２）：４９—５１．　【３】王金勇；等．２０１２年中国饲料和原料霉菌毒素检测报告［Ｊ】＿中国畜　牧杂志，２０１３，４９（４）：２９—３４．　・——●—一　”—＋一．．—卜“—＋一・・十一——＋一一＋・・＋・・＋・・＋・・＋・・＋”＋・・＋“＋・・＋・・＋・・＋・・＋・・十一十・・　”——●一・・—－●一・　中医治疗初生牛犊先天不足　王孝明　（辽宁省大连市普兰店市安波动物卫生监督所，辽宁大连１１６２１１）　ＤＯｌ：１０．３９６９／Ｊ．ＩＳＳＮ．１６７１－６０２７．２０１５．０８．０１９　２０１５年６月２４日，辽宁省大连市普兰店安波镇金鸡村　李某电话叙述病情：家有一头母牛于５ｄ前生产一对双胞胎　自拟中药引火汤灌服，方剂组成：熟地２０ｇ，白芍１５ｇ，巴　戟天１５ｇ，破故纸１５ｇ，麦门冬２０ｇ，白术１５ｇ，茯苓１５ｇ，山茱　牛犊，出生后其中有一头牛犊精神稍差，体格弱，食欲低，有　明显的卧地嗜睡现象，并且越来越重，发展到昨日已经不食，　卧地不起，嗜睡。当地兽医予以抗生素治疗无效，遂邀本人前　往诊治。现将病例详情报告如下：　１临床症状　萸１５ｇ，黄芪２５ｇ，甘草ｌＯｇ；水煎１５ｍｉｎ，二次合一，１次灌服。　１次，ｄ，连用３次。　方解：熟地、麦冬滋肾水，巴戟天、破故纸引君火归位，白　芍收敛散在阳气，山茱萸补肝阴，制肝阳。黄芪补肺气，增加　肺脏收敛君火人肾。白术、茯苓、甘草补脾生金，增强肺脏功　能，把上越的君火收敛入。肾。　３小结　此牛犊对外界刺激反应迟钝，体温正常，卧地嗜睡，扶起　运动，肢体不伸。眼结膜，嘴唇四周及口腔内可视粘膜红染，　似红布，大小便正常。　２辨证治疗　此证为先天。肾水不足，肝木飞越之证。水是木之母，水可　灭火。心肝火旺，造成火势漫天的根源在。肾。肾阴亏虚，火无　所依，木火上越。心主君火，火势上炎，敛降不足，肺主收敛，　红色代表火，火性上炎，易蒙上。对外界刺激反应迟钝，　卧地嗜睡，中医认为，“诸禁鼓栗，如丧神守，皆属于火”。　精神反应迟钝，如丧神守，是火性蒙上造成的。肝，五行　属木，具生发条达之性。皇帝八十一问第十九问说：“肝家气　痛起卧懒，壅毒注闷张口喘，两眼赤色把头秤……。肢体屈伸　相火不降而火势滔天。治则，增强肺脏的收敛功能，收敛君火　人肾，而生相火。滋补肝肾之阴而制阳光。　上药一剂红色消退近半，食欲见好，运动如常，二剂痊　愈，加强疗效，投三剂而愈，畜主甚欢。　不利，肝失条达而郁结，郁而化火。火势滔天。　２０１５年第０８期　－０ａ翟瞿蚕盟国０－