CYP2E1基因和GSTP1基因的多态性与食管癌的易感性

CYP2E1基因和GSTP1基因的多态性与食管癌的易感性

姓名：王伟申请学位级别：硕士专业：内科学（消化）指导教师：施瑞华;赵志泉

20040420

南京医利大学硕十学位论文细胞色素Ｐ４５０２Ｅｌ和谷胱甘肽转硫酶Ｐ１基因的多态性与食管癌的易感性中文摘要食管癌足最常见的消化系统恶性肿瘤之一，我国是世界上食管癌高发区之一。９０年代初人口抽样调查结果显示，食管癌死亡率排在胃、肝、肺癌之后，位于肿瘤死亡率的第四位。全国平均年粗死亡率为１７．１９／１０万，调整死亡率为１５．１５／１０万。对病因和发病机制的研究历经几十年，虽已取得重大进展，但迄今尚未完全阐明，发病率和死亡率仍居高不下，严重危害着人民的生命和健康。因此，深入进行食管癌研究，积极采取有效的预防控制措施成了当务之及。为此，本课题以南京周围人群为基础进行了分子流行病学研究。第一部分细胞色素Ｐ４５０２Ｅ１（ＣＹＰ２Ｅ１）基因的多态性与食管癌遗传易感性关系的探讨食管癌的发生是‘个多因素多步骤的过程，对于非高发区而言，吸烟、饮酒与食管癌的联系备受人们重视。细胞色素Ｐ４５０２Ｅ１编码二甲基亚硝胺Ｄ．脱甲基酶，此酶可被乙醇等化合物诱导，参与旺硝胺和低分子量卤代烃等多种化合物在体内的代谢。本研究应用聚合酶链反应．性片段长度多态性（ＰＣＲ—ＲＦＬＰ）技术对ＣＹＰ２Ｅ１基因的ＲｓａＩ位点和ＤｒａＩ位点的多态性与食管癌易感性间的关系进行了探讨。主要结果如下：１．ＣＹＰ２ＥＩ基因ＲｓａＩ位点、ＤｒａＩ位点多态性与食管癌易感性的关系南京医科人学硕士学位论文ＣＹＰ２Ｅ１基因ＲｓａＩ位点各基因型在食管癌病例组中的分伟频率分别为Ａ（纯合子野生型ｃｌ／ｃ１）型６１．５％、Ｂ（杂合子型ｃｌ／ｃ２）型３０．８％、Ｃ（纯合子突变型）型７．７％；在对照组分布频率分别为Ａ型５０．８％、Ｂ型３５．６％、Ｃ型１３．６％，各基因型在食管癌组和对照组中分布的差异尚未达到显著性的程度（Ｘ２＝２．１７０，Ｐ＝０．１４１）。ＣＹＰ２Ｅ１基因ＤｒａＩ位点各基因型的频率在食管癌组和对照组差异也无显著性（Ｘ２＝０．７８５，Ｐ＝０．３７６）。２．ＣＹＰ２Ｅ１基因多态性与吸烟、饮酒联合作用对食管癌的影响在考虑饮酒因素的情况下，我们以既不吸烟又非ＣＹＰ２Ｅ１Ｃ１／Ｃ１基因型的个体为参照，分析ＣＹＰ２Ｅ１基因型与吸烟的相互作用，结果显示Ｃ１／Ｃ１基因型或吸烟单一因素的优势比（ＯＲ）分别为１．９３５和２．００９，而既吸烟又携带ＣＹＰ２Ｅ１ＣＩ／Ｃ１基因型的个体的优势比为０．９６２；同样在考虑吸烟因素影响情况下，把既不饮酒又非Ｃ１／Ｃ１基因型的个体作为参照，携带Ｃ１／Ｃ１基因型且饮酒的个体与其相比，其优势比为Ｏ．３３８。ＣＹＰ２Ｅ１基因ＲｓａＩ位点多态性与吸烟、饮涌对食管癌易感性未见协同作用。同上所述，ＣＹＰ２Ｅ１ＤｒａＩ位点的多态性与吸烟、饮酒也无协同作用，与参照相比其优势比分别为Ｏ．８０９和０．７１４。第二部分ＧＳＴＰｌ基因型与食管癌遗传易感性关系的研究代谢酶遗传多态性与机体的活化解毒能力的个体差异有关，谷胱甘肽转硫酶（ＧｓＴＳ）的缺乏，可能影响对某些化学物质的代谢解毒过程，从而增加个体的患癌风险，但目前的研究结论颇不一致。本文运用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术就ＧＳＴＰｌ基因型与食管癌遗传易感２南京医科人学硕士学位论文性的关系进行了进一步探讨。主要结果如下：１．ＧＳＴＰｌ各基因型在病例、对照组中的分布ＧＳＴＰｌ基因各基因型在食管癌病例组中的分布频率分别为纯合子野生型（１ａ／ｌａ）６６．７％、杂合子型（１ａ／ｌｂ）２８．２％、纯合子突变型（１ｂ／ｌｂ）５．１％；在对照组分布频率分别为ｌａ／ｌａ型６４．４％、ｌａ／ｌｂ型３１．４％、１ｂ／ｌｂ型４．２％，各基凶型在食管癌组和对照组中分布的差异无显著性（Ｘ２＝０．１６８，Ｐ＝０．６８２）。２．ＧＳＴＰｌ基因多态与吸烟、饮酒联合作用对食管癌的影响我们以既为ＧＳＴＰｌ１ａ／ｌａ基因型又不吸烟的个体为参照，在考虑饮酒因素的同时，分析ＧＳＴＰｌ各基因型与吸烟的相互作用，结果显示变异基因型或吸烟单一因素的优势比（ＯＲ）分别为２．０１６和３．１６７，而既吸烟又携带ＧＳＴＰｌ变异基因型的个体的优势比为Ｏ．７１９；同样在考虑吸烟因素的情况下，分析ＧＳＴＰｌ各基因型与饮酒的相互作用，不携带１ａ／ｌａ基因型且饮酒的个体与参照相比，其优势比为１．０１６。表明ＧＳＴＰｌ基因的多态性与吸烟、饮酒的联合对食管癌易感性无协同作用。３．ＣＹＰ２Ｅ１和ＧＳＴＰｌ联合基因型与食管癌遗传易感性关系的探讨ＣＹＰ２Ｅ１基因属Ｉ相代谢酶类基因，它可以活化某些前致癌物，ＧＳＴＰｌ基因属ＩＩ相代谢酶类基因，它可使活化的致癌物失活，此两类基因多态性理论上可能有协同致癌性。因而本研究就ＣＹＰ２Ｅ１和ＧＳＴＰｌ联合基因型与食管癌遗传易感性关系的探讨。携带ＣＹＰ２Ｅ１Ｃ１／Ｃ１基因型和ＧＳＴＰｌｌａ／ｌｂ＋ｌｂ／ｌｂ基因型的个体南京医科大学硕士学位论史与对照相比，其优势比为１．５００，而ＣＹＰ２Ｅ１Ｃ１／Ｃ１基因型、ＧＳＴＰｌ１ａ／ｌｂ＋ｌｂ／ｌｂ基因型单一因素的优势比分别为０．９０９、０．６４３，未发现二者间存在明显协同作用。同样ＣＹＰ２Ｅ１ＤＤ基因型与ＧＳＴＰｌｌａ／ｌｂ＋ｌｂ／ｌｂ基因型亦无协同作用。关键词：基因多态性谷胱甘肽转硫酶细胞色素Ｐ４５０２Ｅ１病例对照研究食管癌分子流行病学南京医科大学硕十学位论文ＡＭｏｌｅｃｕｌａｒＥｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌＳｔｕｄｙＯＨｔｈｅＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＧｅｎｅｔｉｃＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｏｆＣＹＰ２Ｅ１、ＧＳＴＰｌａｎｄＳｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｔｏＥｓｏｐｈａｇｅａｌＣａｎｃｅｒＥｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｄｒｅａｄｅｄｄｉｓｅａｓｅｓｉｎＣｈｉｎａ，ｃａｎｃｅｒｄｉｓｐｌａｙｉｎｇｐｏｏｒｐｒｏｇｎｏｓｉｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｅａｒｌｙｅｓｏｐｈａｇｅａｌｌｙｍｐｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｅｓｃａｎｗｉｔｈｏｕｔｂｅｔｒｅａｔｅｄｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｅａｓｉｌｙａｎｄｓａｆｅｌｙ，ｆｏｒａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｕｃｏｓａｌｒｅｓｅｃｔｉｏｎ．Ｔｈｕｓ，ｅａｒｌｙｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃｅｘａｍｐｌｅ，ｂｙｅａｒｌｙｄｉａｇｎｏｓｉｓｃａｎｃｅｒ．Ｔｏａｒｅｅｓｓｅｎｔｉａｌｆｏｒｉｍｐｒｏｖｉｎｇｔｈｅｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆｅｓｏｐｈａｇｅａｌｔｈｉｓｏｎｒｅａｃｈｔａｒｇｅｔ，ａｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ—ｂａｓｅｄｃａｎｃｅｒｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｎｔｈｅｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｔｕｄｙｅｓｏｐｈａｇｅａｌｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄＮａｎｊｉｎｇａｒｅａｓｏｆＪｉａｎｇｓｕＰｒｏｖｉｃｅＰａｒｔＩＴｈｅＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎＧｅｎｅｔｉｃＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｏｆＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４Ｓ０２ＥＩ（ＣＹＰ２ＥＩ）ａｎｄＳｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙＥｓｏｐｈａｇｅａｌＣａｎｃｅｒｔｏＴｈｅｒｅｉｓａｒｅｃｏｎｓｉｄｅｒａｂｌｅｅｖｉｄｅｎｃｅｓｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇｔｈａｔｈｕｍａｎｅｓｏｐｈａｇｅａｌｐｒｏｃｅｓｓｃａｎｃｅｒａｍｕｌｔｉｓｔａｇｅｗｉｔｈｍｕｌｔｉｐｌｅｒｉｓｋｆａｃｔｏｒｓ．ＡｌｃｏｈｏｌａｒｅａｓｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎａｎｄｓｍｏｋｉｎｇｈａｂｉｔａｒｅｍａｊｏｒｒｉｓｋｆａｃｔｏｒｓｉｎｌｏｗｒｉｓｋＣＹＰ２Ｅ１，ａｍｅｍｂｅｒｏｆｔｈｅｃ”ｏｃｈｒｏｍｅＰ－４５０ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ，ｃａｎｂｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙｅｔｈａｎｏｌａｎｄｃａｔａｌｙｓｅｓｔｈｅｏｘｉｄａｔｉｏｎｏｆｍｏｒｅ７５ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ，ｓｅｖｅｒａｌｅｔｈａｎｏｌｐｏｔｅｎｔｉａｌｉｔｓｅｌｆ，ｄｒｕｇｓ，ａｎｄｉｎｃｌｕｄｉｎｇｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｓ（ｓｏｍｅｔｏｔｈｅｉｒｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｓ，ｂｅｎｚｅｎｅ，ａｎｉｌｉｎｅｅｔａ１）ｔｈａｔａｔｅｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｕｌｔｉｍａｔｅ５南京医科大学硕士学位论文ｒｅａｃｔｉｖｅｆｏｒｍｓ．Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ—ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｕｔｉｌｉｚｅｄｔｏｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＰＣＲ—ＲＦＬＰ、ｗａｓｂｅｔｗｅｅｎａｎａｌｙｚｅｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｔｈｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＲｓａＩｓｉｔｅｉｎｔｈｅ５＂－ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｒｅｇｉｏｎａｎｄＤｒａＩｔｏｓｉｔｅｉｎｉｎｔｒｏｎ６ｏｆＣＹＰ２Ｅ１ｗｉｔｈｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｒｅｓｕｌｔｓａｓｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅｆｏｌｌｏｗｉｎｇｂｅｔｗｅｅｎ１．ＴｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｔｏｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆＣＹＰ２Ｅ１ｇｅｎｏｔｙｐｅａｎｄｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒＴｈｅｒｅｗｅｒｅｔｈｒｅｅｇｅｎｏｔｙｐｅｓｏｆＣＹＰ２Ｅ１ｒｅｓｕｌｔｉｎｇｆｒｏｍｄｉｇｅｓｔｉｏｎｗｉｔｈｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅＲｓａＩ：ｔｙｐｅＡ，ａｗｉｌｄ—ｔｙｐｅｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅｔｈｅｃｌ／ｃｌ；ｔｙｐｅＢ，ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｔｅＣ１／ｃ２；ａｎｄｔｙｐｅＣ，ａｍｕｔａｎｔｔｙｐｅｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅｃ２／ｃ２．Ｉｎａｒｅｃａｓｅｓ，ｔｈｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆＡｇｅｎｏｔｙｐｅ，ＢｇｅｎｏｔｙｐｅａｎｄＣｇｅｎｏｔｙｐｅ６１．５％．３０．８％ａｎｄ７．７％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｉｎｃｏｎｔｒｏｌｓ，ｔｈｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆＡｇｅｎｏｔｙｐｅ．ＢｇｅｎｏｔｙｐｅａｎｄＣｇｅｎｏｔｙｐｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｒｅｉｓｎｏｔＢａｎｄＣａａｒｅ５０．８％，３５．６％ａｎｄ１３．６％ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｈｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆＡ，ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ（Ｘ２＝２．１７０，Ｐ＝０．１４１）．ＡｓｆｏｒｔｈｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃａｎｄＤｒａＩａｓｉｔｅｉｎｉｎｔｒｏｎ６ｏｆＣＹＰ２Ｅ１，ＴｈｅｒｅｉｓａｌｓｏｎｏｔｔｈｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆＤＤ，ＣＤａｎｄＣＣｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｇｅｎｏｔｙｐｅｓ（Ｘ２＝０．７８５，Ｐ２０．３７６）．２．ＴｈｅｃｏｍｂｉｎｅｄｅｆｆｅｃｔｂｅｔｗｅｅｎｇｅｎｅｔｉｃｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｏｆＣＹＰ２Ｅ１ａｎｄｓｍｏｋｉｎｇ，ｄｒｉｎｋｉｎｇｏｎｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒＳｕｂｊｅｃｔｓｗｈｏｈａｄＡｇｅｎｏｔｙｐｅｏｆＣＹＰ２Ｅ１ａｎｄｓｍｏｋｉｎｇｈａｄ１．０ｆｏｌｄｓｒｉｓｋｃａｎｃｅｒｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｏｓｅｗｈｏｈａｄＢｔｏｏｒＣｇｅｎｏｔｙｐｅｏｆＣＹＰ２Ｅ１ａｎｄｎｏｔｓｍｏｋｉｎｇ．ＩｎｄｉｖｉｄｕａｌｓｅｘｐｏｓｅｄＡ６南京医科人学坝ｌｊ学位论文ｇｅｎｏｔｙｐｅｏｆＣＹＰ２Ｅ１ａｎｄｎｏｔｓｍｏｋｉｎｇｈａｄ１．９ｆｏｌｄｓｒｉｓｋｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｏｒＢｗｈｏｈａｄＩｎｄｉｖｉｄｕａｌｓｃａｎｃｅｒ，ａｎｄｅｓｏｐｈａｇｅａｌＣｇｅｎｏｔｙｐｅｂｕｔｈａｄｓｍｏｋｅｈａｂｉｔｈａｄ２．０ｆｏｌｄｓｒｉｓｋｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒ．Ｓｏｔｈｅｒｅｉｓｎｏｔ１ｏｆＣＹＰ２Ｅｂｅｔｗｅｅｎｅｆｆｅｃｔｃｏｍｂｉｎｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｇｅｎｅｔｉｃｆｉｎｄｉｎｇｏｎａｎｄｓｍｏｋｉｎｇｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅｓａｍｅｎｏｔｔｏｔｈａｔ，ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｏｆＣＹＰ２Ｅ１ａｎｄｄｒｉｎｋｉｎｇｈａｖｅａｌｓｏｃｏｍｂｉｎｅｄｅｆｆｅｃｔｏｆＧｅｎｅｔｉｃｂｅｔｗｅｅｎＴｈｅ１ＩＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍＰａｒｔＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＰ１（ＧＳＴＰＩ）ａｎｄＳｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｔｏＥｓｏｐｈａｇｅａｌＣａｎｃｅｒＧＳＴｓｃａｔａｌｙｚｅｔｈｅｂｉｎｄｉｎｇｏｆａｌａｒｇｅｖａｒｉｅｔｙｏｆｅｌｅｃｔｒｏｐｈｉｌｅｓｔｏｔｈｅｔｈｅｄｅｔｏｘｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｉｎｉｎｖｏｌｖｅｄｏｆｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ，ａｒｅｓｕｌｆｙｄｒｙｌｇｒｏｕｐｒａｄｉｃａｌｓ．ａｎｄｈａｖｅａｍａｉｎｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｔｈｅｂｉｎｄｉｎｇａａｎｄｔｒａｎｓｐｏｒｔｏｆａｗｉｄｅ１ｉｓｖａｒｉｅｔｙｏｆｈａｒｍｆｕｌｃｏｍｐｏｕｎｄｓ．ＧＳＴＰｍａｊｏｒＧＳＴｉｓｏｆｏｒｍｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｈｕｍａｎｅｓｏｐｈａｇｕｓａｎｄｈａｓｂｅｅｎｓｈｏｗｎｔｏｂｅｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＯｎｅｓｉｎｇｌｅ．ｂａｓｅｍｕｔａｔｉｏｎｓｗｉｔｈｉｎｅｘｔｒｉｎ５ｈａｓｂｅｅｎｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｔｈａｔｒｅｓｕｌｔｉｎＩｌｅ—ｔｏ．Ｖａｌｃｈａｎｇｅｉｎｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎ，ｗｈｉｃｈａｌｔｅｒａｆｆｉｎｉｔｙＧＳＴＰ１ａｎｄａｃｔｉｖｉｔｙｆｏｒｓｏｍｅｓｕｂｓｔｒａｔｅｓｏｆｔｈｅｅｎｚｙｍｅ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｔｈｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｍａｙａｌｓｏｈａｖｅｐｏｔｅｎｔｉａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｎｃａｎｃｅｒｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ．Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ—ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｕｔｉｌｉｚｅｄｔｏｆｒａｇｍｅｎｔｔｈｅｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）ｗａｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅａｎａｌｙｚｅｅｘｔｒｏｎｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＢｓｍＡＩｓｉｔｅｉｎ５ｏｆＧＳＴＰ１７南京医科人学硕Ｌ学位论文ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｔｏｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓａｓｆｏｌｌｏｗｉｎｇ１．ＴｈｅｒｅｗｅｒｅｔｈｒｅｅｇｅｎｏｔｙｐｅｓｏｆＧＳＴＰ１ｒｅｓｕｌｔｉｎｇｆｒｏｍｄｉｇｅｓｔｉｏｎｗｉｔｈｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅＢｓｍＡＩ：ａａｗｉｌｄ—ｔｙｐｅｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅ１ａ／１ａ；ｔｈｅｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｔｅｌａ／ｌｂ；ａｎｄｍｕｔａｎｔｔｙｐｅｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅｌｂ／ｌｂ．Ｉｎｃａｓｅｓ，ｔｈｅａｒｅｌｂ／ｌｂａｎｄｏｆｌａ／ｌａｇｅｎｏｔｙｐｅｇｅｎｏｔｙｐｅｇｅｎｏｔｙｐｅ，ｌａ／ｌｂｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ５９．０％．３４．６％ａｎｄ６．４％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｉｎｃｏｎｔｒｏｌｓ，ｔｈｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆｌａ／１ａｇｅｎｏｔｙｐｅ．１ａ／ｌｂｇｅｎｏｔｙｐｅａｎｄｌｂ／ｌｂｇｅｎｏｔｙｐｅａｒｅ５２．５％，４０．７％ａｎｄ６．８％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｒｅｉｓｎｏｔｏｆ１ａ／ｌａ，ｌａ／ｌｂａｎｄｌｂ／ｌｂａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｈｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｇｅｎｏｔｙｐｅｓ（Ｘ２＝０．１６８，Ｐ＝Ｏ．６８２）．２．ＳｕｂｊｅｃｔｓｗｈｏｈａｄｍｕｔａｎｔｇｅｎｏｔｙｐｅｏｆＧＳＴＰｌａｎｄｓｍｏｋｉｎｇｈａｄ０－７ｆｏｌｄｓｒｉｓｋｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒｃｏｍｐａｒｅｄａｎｄｎｏｔｗｉｔｈｔｈｏｓｅｗｈｏｈａｄ１ｏｆＧＳＴＰｇｅｎｏｔｙｐｅｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅｗｉｌｄ．．ｔｙｐｅｓｍｏｋｉｎｇ．ＩｎｄｉｖｉｄｕａｌｓｎｏｔｅｘｐｏｓｅｄｆｏｌｄｓｔｏｍｕｔａｎｔｇｅｎｏｔｙｐｅｇｅｎｏｔｙｐｅｏｆＧＳＴＰｌａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｅｓｏｐｈａｇｅａｌｓｍｏｋｉｎｇｈａｄ２．０ｈａｄｒｉｓｋｃａｎｃｅｒ，ａｎｄＩｎｄｉｖｉｄｕａｌｓｗｈｏ３．２ｈａｂｉｔｈａｄｂｕｔｈａｄｓｍｏｋｅｇｅｎｏｔｙｐｅｗｉｌｄ—ｔｙｐｅｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅｇｅｎｏｔｙｐｅｆｏｌｄｓｒｉｓｋｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒ．ＳｏｔｈｅｒｅｉｓｎｏｔｆｉｎｄｉｎｇｃｏｍｂｉｎｅｄａｎｄｓｍｏｋｉｎｇｏｎｅｆｆｅｃｔｂｅｔｗｅｅｎｇｅｎｅｔｉｃｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｔｏｏｆＧＳＴＰ１ｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅｓａｍｅｄｒｉｎｋｉｎｇｈａｖｅａｌｓｏｎｏｔｔｈａｔ，ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｏｆＧＳＴＰ１ａｎｄｃｏｍｂｉｎｅｄｅｆｆｅｃｔ．ｂｅｔｗｅｅｎＧｅｎｅｔｉｃＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｏｆＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ３．ＴｈｅＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐＰ４５０２Ｅ１ａｎｄｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＰ１．ＳｕｂｊｅｃｔｓｗｈｏｈａｄＡｇｅｎｏｔｙｐｅｏｆＣＹＰ２Ｅ１ａｎｄｍｕｔａｎｔｇｅｎｏｔｙｐｅｏｆ８南京医科大学硕Ｊ．学位论文ＧＳＴＰ１ｈａｄ１．５ｆｏｌｄｓｒｉｓｋｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｅｓｏｐｈａｇｅａｌｔｈｏｓｅｗｈｏｈａｄＢｏｒｃａｎｃｅｒｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＣｇｅｎｏｔｙｐｅｏｆＣＹＰ２Ｅ１ａｎｄｗｉｌｄ—ｔｙｐｅｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅｇｅｎｏｔｙｐｅ．ＩｎｄｉｖｉｄｕａｌｓｅｘｐｏｓｅｄｔｏＡｇｅｎｏｔｙｐｅｏｆＣＹＰ２Ｅ１ａｎｄｗｉｌｄ—ｔｙｐｅｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅｇｅｎｏｔｙｐｅｈａｄ０．９ｆｏｌｄｓｒｉｓｋｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｇａｎｄＩｎｄｉｖｉｄｕａｌｓｗｈｏｈａｄＢｏｒＣｇｅｎｏｔｙｐｅｂｕｔｈａｄｍｕｔａｎｔｇｅｎｏｔｙｐｅｏｆｃａｎｃｅｌＧＳＴＰ１ｈａｄ０．６ｆｏｌｄｓｒｉｓｋｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｅｓｏｐｈａｇｅａｌＳｏｔｈｅｒｅｉｓｎｏｔｆｉｎｄｉｎｇｃｏｍｂｉｎｅｄｅｆｆｅｃｔｂｅｔｗｅｅｎｇｅｎｅｔｉｃｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｏｆＣＹＰ２Ｅ１ａｎｄＧＳＴＰ１ｏｎｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｌＴｈｅｓａｍｅｔｏｔｈａｔ，ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｏｆＤｒａＩｓｉｔｅｉｎｉｎｔｒｏｎ６ｏｆＣＹＰ２Ｅ１．ａｎｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｏｆＧＳＴＰ１ｈａｖｅａｌｓｏｎｏｔｃｏｍｂｉｎｅｄｅｆ兜ｃｔ９细胞色素Ｐ４５０２Ｅｌ和谷胱甘肽转硫酶Ｐ１基因的多态性与食管癌的易感性引言食管癌是最常见的消化系统恶性肿瘤之一，我国是其高发区之、・，年死１Ｌ＝人数占世界的‘半以上。食管癌的早期发现较为困难，发现时大多数已是中晚期，预后差，病死率高。降低食管癌发病率、死亡率的最有效途径就是预防，尤其是一级预防（病因预防）。因此，深入探讨其病因、癌变机制及其防治对策具有重大的现实意义。食管癌的病因复杂，其发生是遗传因素和环境因素相互作用的结果。在食管痛的病因学研究中，宏观流行病学研究已揭示出某些影响食管癌发病的危险因素。近年来，正迅速发展的分子生物学技术为从分子及基因水平进行人群研究，用生物标志鉴别易感标志提供了新方法，为阐明不同人群间肿瘤的易感程度和发病机制提供了有力手段。为此，本课题在南京周围地区开展了以人群为基础的病因流行病学研究，从分子水平探讨食管癌的潜在危险因子，研究遗传、环境危险因素在食管癌发生中的联合作用，为食管癌高危人群的筛查和预防控制工作提供科学依据。本课题主要从以下几个方面进行研究：（１）探讨毒物代谢Ｉ相酶细胞色素Ｐ４５０２Ｅ１基因多态性与食管癌遗传易感性的关系。（２）探讨毒物代谢ＩＩ相酶古胱甘肽转硫酶ＧＳＴＰｌ基因多态性与食管癌遗传易感性的关系。南京【基科大学顿十学位论文第一部分细胞色素Ｐ４５０２ＥＩ基因多态性与食管癌遗传易感性的关系的探讨食管癌的发生是一个十分复杂的生物学过程，是遗传因素和环境凶素相互作用的结果。但是，暴露在相同的环境因素下，只有很少一部分人患食管癌的事实表明，个体是否患食管癌并非单纯取决于环境因素，还取决于个体的遗传易感性。９５％以上的环境致癌物属于间接（前）致癌物，许多环境致突变物亦为间接致突变物，它们进入体内后需经过细胞色素混合功能氧化酶系（ＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０ｓ，ＣＹＰｓ）代谢活化，将无活性的前致癌物激活转变为亲电子化合物，亲电子化合物可以攻击细胞内的生物大分子，与ＤＮＡ或蛋白质形成加合物，最终引起癌基因和抑癌基因功能的改变，从而导致癌变。ＣＹＰｓ表型、基因型的遗传多态性决定了不同个体对不同致癌物代谢的差异性和肿瘤的化学致癌易感性。因此，探讨ＣＹＰｓ基因多态性与肿瘤易感性之间的关系，对于逐步确立ＣＹＰＳ遗传标志物，筛选肿瘤易感和高危人群，预防肿瘤的发生具有重要意义。细胞色素Ｐ４５０２Ｅｌ（ＣＹＰ２Ｅ１）是ＣＹＰ４５０大家族主要成员之一，该基因编码二甲基亚硝胺Ｄ一脱甲基酶，此酶可被乙醇等化合物诱导，参与亚硝胺和低分子量卤代烃等多种化合物在体内的代谢活化ｕＩ。ＣＹＰ２Ｅ１基因存在多个性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）【２１，近年来有研究报道，位于基因５＂－侧远端与转录调节有关的内切酶ＲｓａＩ、ＤｒａＩ识别位点的性片段长度多态性与胃癌、肝癌、肺癌等肿瘤的遗传南京医科夫学硕十学位论爻易感性有关ｍ５。。为进一一步研究和验证ＣＹＰ２Ｅ１基因ＲｓａＩ、ＤｒａＩ酶切位点的多态性与食管癌遗传易感性的关系，我们运用多聚酶链反应一性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）技术，在南京周围地区的人群中进行了病例一对照分子流行病学研究。研究对象和方法一、研究对象：在２００２年１０月一２００３年６月期问，于南京医科大学第一附属医院消化内镜中心，随机收集经组织病理学确诊的食管癌７８例，ｌ司时收集与病历组相同年龄组段、无癌症病史的一般人群对照１１８例。通过调查状取研究人群的姓名、性别、年龄、籍贯以及吸烟史和饮酒史等方面的资料。每天吸烟大于或等于５支，且时间至少４年者定义为吸烟者扣１。本研究的饮滔者定义为每天饮酒摄入乙醇量大于５０ｍｌ，且每周饮酒超过五次，时间超过‘年者‘７１。二、方法：１．流行病学调套对所有研究对象均进行流行病学问卷调查后，采集患者和对照人群三块正常的食管活检标本，食管癌患者活检处应位于病变部位远端正常组织（＞５ｃｍ），活检组织立即放入ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管后置入液氮罐休克冷冻，２０分钟后送一８００Ｃ冰箱保存。２．主要试剂：（１）用于ＤＮＡ提取的试剂：南京医科大学硕｛一学位论文Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｂｕｆｆｅｒ：１ＭＴｒｉｓ－Ｈｃｌ０．５ｍｌ，ＰＨ８．０、０．５ＭＥＤＴＡ１０ｍｌ，ＰＨ８．０、１０％ＳＤＳ２５０ｕｌ，加双蒸水全５０ｍｌ。蛋白酶Ｋ（１０ｍｇ／ｍ１）：称取蛋白酶Ｋ２０ｍｇ，加双蒸水至２ｍｌ，分装后一２００Ｃ储存。ＴＥ缓冲液：１ＭＴｒｉｓ—Ｈｃｌ１ｍｌ，ＰＨ８．０、０．５ＭＥＤＴＡ０．２ｍｌ，ＰＨ８．０，加双蒸水至１００ｍｌ。饱和酚、氯仿、无水乙醇、７５％乙醇（２）ＰＣＲ．ＲＦＬＰ试齐Ｕ：ＣＹＰ２Ｅ１基因ＲｓａＩ、ＤｒａＩ酶切位点的引物由加拿大上海Ｓｏｎｇｏｎ公司合成。ｄＮＴＰｓ和ＤＮＡＭａｒｋｅｒ为加拿大Ｉ：海Ｓｏｎｇｏｎ公司产品。ＲｓａＩ、ＤｒａＩ性内切酶为加拿大上海Ｓｏｎｇｏｎ公司产品。ＴａｑＤＮＡ多聚酶、ＰＣＲ反应缓冲液、ＭｇＣｌ２为ＭＢＩＦＥＲＭＥＮＴＡＳ公司产品。３．主要仪器ＰＴＣ．２００ＰＣＲ扩增仪１．ＯＲ冷冻离心机Ｈｅｒａｅｕｓｍｅｇａｇｕｇｅ３２０型ＰＨ计Ｈ１３１０型磁力搅拌器Ｐｈａｒｍａｃｉａｂｉｏｔｅｃｈｕｌｔｒｏｓｐｅｃ２０００公司紫外分光光度计ＤＤＹ．Ａ型电泳仪ＺＦ．３型紫外线投射仪南京医科人学倾十学位论文Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｙｓｔｅｍ凝胶成像系统电子天甲４．ＣＹＰ２Ｅｌ基因多态性检测：（一）基因组ＤＮＡ的提取取３块活检组织，放入５ｍｌ玻璃匀浆器内Ｉ加入０．５ｍｌＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＢｕｆｆｅｒ，插入钻子匀浆，使组织完全磨碎成细胞悬液Ｉ把细胞悬液置入１．５ｍｌ的ＥＰ管中，３７０Ｃ孵育半小时Ｉ加入蛋白酶Ｋ（１０ｕｇ／ｍ１）３０ｕｌ，３７。Ｃ过夜ｌ取出过夜的ＥＰ管，冷却至室温ｌ在ＥＰ管中加入等体积的酚（５００ｕ１），再加入等体积的氯仿（５００ｕ１），充分混匀，置入低温离心机中，１２０００ｒｐｍ，离心１０分钟Ｉ取上层水相，加入等体积氯仿，充分混匀，１２０００ｒｐｍ，１０分钟Ｉ取上层水相，加入２．５倍体积冷无水乙醇沉淀ＤＮＡ，１２０００分钟ｒｐｍ，１５南京医科大学硕Ｌ学位论文轻轻倒去ＥＰ管中的乙醇，用７５％７，醇洗涤沉淀，１２０００ｒｐｍ，１０分钟除去乙醇，把ＥＰ管倒扣在滤纸ｈ３７０Ｃ，烘干（１５分钟左右）用２００ｕｌ的ＴＥ缓冲液溶解ＤＮＡ，一２０。Ｃ保存（二）引物设计参照文献设计ＣＹＰ２Ｅ１基因的扩增引物，由加拿大上海Ｓｏｎｇｏｎ公司合成。ＣＹＰ２Ｅ１基因ＲｓａＩ酶切位点的引物序列为１８】：Ｐｒｉｉｎａｒｌ：５、．ＣＣＡＧＴＣＧＡＧＴＣＴＡＣＡＴＴＧＴＣＡ．３、Ｐｒｉｍｅｔ２：５、．ＴＴＣＡＴＴＣＴＧＴＣＴＴＣＴＡＡＣＴＧＧ一３、ＣＹＰ２Ｅ１基因Ｄｒａｌ酶切位点的引物序列为‘８】：Ｐｒｉｍｅｒｌ：５、．ＴＣＧＴＣＡＧＴＴＣＣＴＧＡＡＡＧＧＡＧＧ一３、Ｐｒｉｍｅｒ２：５、一ＧＡＧＣＴＣＴＧＡ＿ｒＧＣＡＡＧｌ：ＡＴＣＧＣＡ一３、（三）ＰＣＲ扩增反应体系ＣＹＰ２Ｅ１基因体外扩增各试剂用量见下表ＣＹＰ２Ｅ１基因ＰＣＲ体外扩增反应体系（四）ＰＣＲ过程１）在０．５ｍｌ的离心管中依次加入上表中（Ｔａｑ酶除外）的试剂，混匀，高速瞬时离心。２）于冰水浴中加入Ｔａｑ酶２．０Ｕ，混匀，高速瞬时离心。３）于９４０Ｃ预变性５分钟４）对Ｔ－ＲｓａＩ酶切位点：按９４０ｃ变性４５秒，５９０ｃ复性４５秒，７２０Ｃ延伸４５秒，进行３５个循环后，于７２０Ｃ延伸１０分钟。对于Ｄｒａｌ酶切位点：按９４０ｃ变性１分钟，６００ｃ复性１分钟，７２０Ｃ延伸１分钟，进行３５个循环后，于７２０ｃ延伸１０分钟。５）ＰＣＲ产物的检测：配制１％的琼脂糖凝胶（称取Ｏ．５９琼脂糖，加５０ｍｌＴＡＥ溶解，在微波炉上加热成溶胶，３Ｈ．ｚ，３ｕｌ配好的溴乙锭），取９ｕｌ扩增产物与ｌｕｌ溴酚兰上样液混匀后加样。于ＴＡＥ缓冲液中，８０Ｖ电泳约３０分钟，用紫外透射仪观察扩增条带。（五）酶切反应体系：南京医科大学钡士学位论文ＣＹＰ２Ｅ１基因Ｒｓａｌ位点、Ｄｒａｌ位点的扩增产物分别用ＲｓａＩ内切酶和ＤｒａＩ内切酶进行酶切，酶切体系如Ｆ表。ＣＹＰ２Ｅ１基因ＰＣＲ扩增产物性酶切反应体系试剂每份用量１０ｕｌ２ｕｌＯ．５ｕ１７．５ｕｌ２０ｕｌＤＮＡ底物１０×酶切缓冲液性内切酶无菌双蒸水总体积（六）酶切反应操作方法：在灭菌的ＥＰ管中加入７．５ｕ１无菌双蒸水４加入１０×酶切缓冲液２Ｉｕ１加性内切酶０．５Ｊｕｌ加ＰＣＲ扩增产物１０ｕｌ４混匀，高速瞬时离心数秒Ｉ３７０Ｃ水浴，４小时Ｉ南京医科大学硕士学位沦义取１０ｕｌ与２ｕｌ溴酚兰混匀后，上样与２．５％的琼脂糖凝胶巾，８０Ｖ电泳，４０分钟Ｉ紫外透射仪下观察酶切片段条带（七）性片段长度多态性检测：１）ＣＹＰ２Ｅ１基因Ｒｓａｌ酶切位点性片段长度多态性检测：ＣＹＰ２Ｅ１基因ＲｓａＩ酶切位点扩增片段长度为４１０ｂｐ，扩增产物经ＲｓａＩ内切酶消化后分为三种基因型：Ａ（纯合子野生型ｃｌ／ｃ１）型、Ｂ（杂合子型ｃｌ／ｃ２）型、Ｃ（纯合子突变型ｃ２／ｃ２）型。其中Ａ型可被ＲｓａＩ内切酶完全酶切，Ｂ型可被ＲｓａＩ内切酶部分酶切，Ｃ型不能被ＲｓａＩ内切酶酶切。ＣＹＰ２Ｅ１基因ＲｓａＩ酶切位点扩增片段经Ｒｓａｌ内切酶消化后产生３６０ｂｐ和５０ｂｐ两个片段，如下图１．１所示：１２３４ＭＳ６７图１．１ＰＣＲ扩增的ＣＹＰ２Ｅ１基因片段经ＲｓａＩ性酶切后的琼脂糖凝胶电泳图谱Ｍ泳道为ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；３．４、５、６泳道为Ｃ１／Ｃ１纯合子；ｌ８南京医科大学坝Ｌ学位论文２．７泳遭为Ｃ１／Ｃ２杂合子；１泳道为Ｃ２／Ｃ２纯合子。２）ＣＹＰ２Ｅ１基Ｄｒａｌ酶切位点性片段长度多态性检Ｎ．－ＣＹＰ２Ｅ１基凶ＤｒａＩ酶切位点扩增片段长度为１００８ｂｐ，扩增产物经ＤｒａＩ内切酶消化后分为三种基因型：纯合子野生型（ＤＤ）型、８杂合子型（ＣＤ）型、Ｃ纯合子突变型（ＣＣ）型。其中ＤＤ型可被ＤｒａＩ内切酶完全消化成５７４Ｄｒａｌ内切酶消化成８７６ｂｐ、３０２ｂｐ和１３２ｂｐ的片段，ＣＤ型可被ｂｐ的片段，ｃｃｂｐ、５７４ｂｐ、３０２ｂｐ、１３２型被Ｄｒａｌ内切酶消化成８７６ｂｐ和１３２ｂｐ的片段，如下图１．２所示：ｌ２３４５Ｍ６７８图１．２ＰＣＲ扩增的ＣＹＰ２Ｅ１基因片段经Ｄｒａｌ性酶切后的琼脂糖凝胶电泳图谱Ｍ泳道为ＤＮＡＭａｒｋｅｒ：１．３．４、６、７泳道为ＤＤ纯合子；２．８泳道为ＣＤ杂合子；５泳道为ＣＣ纯合子。三、资料分析和数据统计】９所有实验室数据均经过反复核查和编码，用Ｅｘｃｅｌ软什建立数据库，在ＳＡＳ软件包中进行各种数据分类处理，以卡方检验确定ＣＹＰ２Ｅ１各基因型在病例和对照组中分布的差异。以优势比（Ｏｄｄｓｒｍｉｏ，ＯＲ）及其９５％可信区问（９５％Ｃｏｎｆｉｄｅｎｃｅｉｎｔｅｒｖａｌ，９５％ＣＩ）表示相对危险度，并采用分组分析观察在不同生活习惯下ＣＹＰ２Ｅ１基因的多态性与食管癌易感性的关系。结一、遗传平衡检验果为了检验人群的ＣＹＰ２Ｅ１基因性频率是否达到了Ｈａｒｄｙ—Ｗｅｉｎｂｅｒｇ遗传平衡，对对照组人群的基因型频率进行了遗传平衡检验。将观察得到的ｃ１和ｃ２等位基因频率代入基因型的平衡频率（Ｐ２，２ｐｑ，ｑ２），再乘以总人数得到预期基因型分布，然后与实际数进行卡方检验。结果表明，观察值和预期值无统计学显著差异（Ｘ２＝１．４０５，ｄｆ＝２，Ｐ＝Ｏ．４９５），说明基因型频率已达到遗传平衡，具有群体代表性（如表１．１所示）。同样，如表１．２所示，ＣＹＰ２Ｅ１基因ＤｒａＩ位点各基因型频率也达到了Ｈａｒｄｙ—Ｗｅｉｎｂｅｒｇ遗传平衡。表１．１正常人群ＣＹＰ２Ｅ１基因ＲｓａＩ位点遗传平衡检验南京医科大学烦｝Ｊ学位论文＋等位基因频率：ｃｌ＝（６０×２＋４２）／２３６２０．６８６ｃ２＝（１６×２＋４２）／２３６＝０．３１４Ｘ２＝１．４０５，ｄｆ＝２，Ｐ＝０．４９５表１．２正常人群ＣＹＰ２Ｅ１基因Ｄｒａｌ位点遗传平衡检验—————————一一—————————一ＤＤ６２６３ＣＤ４８ＣＣ８基因型苗计１１８１１８实际数期望数＋４６９＋等位基因频率：Ｄ＝（６２×２＋４８）／２３６２０．７２９Ｃ＝（８×２＋４８）／２３６＝０．２７１Ｘ２＝Ｏ．１０９，ｄｒ＝２，Ｐ＝０．９４７二、病例．对照研究年龄、性别均衡性检验如表１．３所示，本病例组共７８例，其中男性５５例，女性２３例；对照组共１１８例，男性７０例，女性４８例。病例组平均年龄为５９．９２±８．８２，对照组为５９．６１±６．７９。两组在年龄和性别上的差异无显著性，具有可比性。表１．３病例一对照研究年龄、性别均衡性检验性年病例对照别女２３４８龄５５７０男５９．９２±８．８２５９．６ｌ±６．７９ｔ＝－０．２８０Ｐ＝０．７８０Ｘ２＝２．５４６Ｐ＝０．１１ｌ２ｌ南京医科大学硕｝．学位ｉ｛仑文三、ＣＹＰ２Ｅ１基因多态性分析１．ＣＹＰ２Ｅ１基因Ｒｓａ］酶切位点多态性与食管癌易感性的关系食管癌组和对照组ＣＹＰ２Ｅ１基因ＲｓａＩ位点各基斟型分布如表１．４和图１．１所示，ＣＹＰ２Ｅ１基因ＲｓａＩ位点各基凶型在食管癌病例组中的分布频率分别为Ａ（纯合子野生型ｅｌ／ｅ１）型６１．５％、Ｂ（杂合子型ｃｌ／ｃ２）型３０．８％、Ｃ（纯合子突变型）型７．７％，在对照组分布频率分别为Ａ型５０．８％、Ｂ型３５．６％、Ｃ型１３．６％，各基因型在食管癌组和对照组中分夼的差异尚未达到显著性的程度（ｘ２＝２．１７０，Ｐ＝０．１４１）。ｅｌ等位基冈在病例中的分布频率为７６．９％，高于对照６８．６％，但未达到显著性差异的程度（Ｘ２＝３．１８９，Ｐ＝０．０７４）。表１．４食管癌病例和对照ＣＹＰ２Ｅ１基因ＲｓａＩ位点各基因型分布２．ＣＹＰ２Ｅ１基因ＤｒａＩ酶切位点多态性与食管癌易感性的关系食管癌组和对照组ＣＹＰ２Ｅ１基因ＤｒａＩ位点各基因型分布如表１．５和图１．２所示，ＣＹＰ２Ｅ１基因ＤｒａＩ位点各基因型在食管癌病例组中的分布频率分别为纯合子野生型ＤＤ为５９．Ｏ％、杂合子型ＣＤ为３４．６％、纯合子突变型ＣＣ为６．４％，在对照组分布频率分别为ＤＤ型５２．５％、ＣＤ型４０．７％、ＣＣ型６．８％，各基因型在食管癌组和对照组中分布的差异尚未达到显著性的程度（ｘ２＝０．７８５，Ｐ＝０．３７６）。ｃｌ等位基因在病，，南京医科大学坝｝。学位论文例－ｐ的分布频率为７６．３％，略高于对照７２．９％，无显著性差异（Ｘ２＝０．５６８，Ｐ＝０．４５１）。表１．５食管癌病例和对照ＣＹＰ２Ｅ１基因Ｄｒａｌ位点各基因型分布例』．』食管癌病例和对照ＣＹＰ２Ｅ１基因Ｒｓａｌ位点各基因型分布图Ｉ．２食管癌病例和对照ＣＹＰ２Ｅ１基因Ｄｒａｌ位点各基因型分布四、病例一对照组中吸烟、饮酒状况研究如表１．６所示，食管癌病例组中吸烟、饮酒者均明显多于对照组，其差异有显著性（Ｅ２值为１３．６７６和２２．８１２，Ｐ值均小于０．０１）。２３南京医科人学硕｛＿学位沦文吸烟状况吸烟者４０３０８８１３．６７６＜０．０１非吸烟者３８饮酒状况饮酒者２７９１０９非饮酒者５１２２．８１２＜Ｏ．０１五、ＣＹＰ２Ｅ１基因多态性与吸烟、饮酒问的相互作用关系如表１．７和１．８所示：在考虑饮洒因素的情况下，我们以既不吸烟又非ＣＹＰ２Ｅ１Ｃ１／ＣＩ基因型的个体为参照，分析ＣＹＰ２Ｅ１基因型与吸烟的相互作用，结果显示Ｃ１／Ｃ１基因型或吸烟单一因素的优势比（ＯＲ）分别为１．９３５和２．００９，而既吸烟又携带ＣＹＰ２Ｅ１Ｃ１／Ｃ１基因型的个体的优势比为０．９６２；同样在考虑吸烟因素影响情况下，把既不饮酒又非Ｃｌ／Ｃ１基因型的个体作为参照，携带Ｃ１／Ｃ１基因型且饮洒的个体与其相比，其优势比为０．３３８。ＣＹＰ２Ｅ１基因Ｒｓａ／位点多态性与吸烟、饮酒对食管癌易感性未见协同作用。同上所述，ＣＹＰ２Ｅ１ＤｒａＩ位点的多态性与吸烟、饮酒也无协同作用，与参照相比其优势比分别为Ｏ．８０９和Ｏ．７１４。表１．７变量ＡＣＹｌｒ２ＥＩ基因多态性和吸烟相互作用与食管癌的危险性变量Ｂ病例对照ＯＲ（９５％ＣＩ）南京蹦科大学颊Ｌ学位论文表１．９ＣＹＰ２Ｅ１基因多态性和饮酒相互作用与食管癌的危险性讨论细胞色素Ｐ４５０（ＣＹＰｓ）是外源性化学物质体内生物转化Ｉ相最主要的代谢酶，是类基因超家族酶系，含晒铁血红素，因还原性Ｐ４５０与一氧化碳有特殊的亲和力，且形成的复合物在分光光度计的４５０ｎｍ处有一特异吸收峰而得名。在ＣＹＰ４５０基因家族中，与食管癌易感性相关的主要是ＣＹＰ２Ｅ１，该基因定位于人类染色体１０ｑ２４．３．ｔｅｒ，艮１１．４ｋｂ，含９外湿子１９】ｏＣＹＰ２Ｅ１编码二ｌ｝Ｊ基亚硝胺Ｄ．脱甲基酶，该酶参与弧硝胺及其前体物和低分子量卤代烃类化合物在体内的代谢。日前已经证明ＣＹＰ２Ｅ１存在６个性酶切位点，即ＴａｑＩ，ＤｒａＩ，ＲｓａＩ和ＭｓｐＩ位点以及５、端非编码区的ＲｓａＩ和Ｐｓｔｌ位点。但只有位于第６内含子的ＤｒａＩ和５、端非编码区的ＲｓａＩ位点的多态性可影响ＣＹＰ２Ｅ１的表达。ＲｓａＩ多态位点位于ＣＹＰＥｌ的转录调节区域，称为Ｃ２等位基因，与ＣＹＰ２Ｅ１基因的表达有关。ＲｓａＩ位点的多态性影响蛋白表达的机制可能是：ＤＮＡ的转录激活区位于５、末端，ＣＹＰ２Ｅ１５、末端的一９８２位ＲｓａＩ酶切多态性位点恰好位于肝转录因子ＨＮＴｌ结合区域（一９６４～９８２）［１０ｌ。ＣＹＰ２Ｅ１基因的本底表达水平一般较底，但可被高度诱导，５、末端的多态性有可能改变该酶的诱导性，变异基因型可能丧失＇厂诱导性而不能被诱掣１”。Ｄｒａｌ多态位点位于ＣＹＰ２Ｅ１基因的第６内含子，称为Ｄ等位基因。该位点的变化不会造成氨基酸序列和蛋白质结构的改变。但有观点认为，内含子中的变异可通过激活隐性剪切位点来影响剪切而导致疾病‘１２Ｊ。也有观点认为，内含子也与基因的表达有关０１３】。南京医科人学硕１１学位论叟Ｌｉｎ等人…１在河南林县以４５例病例和４５例对照研究ＣＹＰ２Ｅ１基冈ＲｓａＩ酶切多态性与食管癌易感性间的关系时发现，食管癌组中Ａ（ＣＩ／Ｃ１）基因型为８０．０％，Ｂ（Ｃ１／Ｃ２）基凶型Ｉ与１３．３％，Ｃ（Ｃ２／Ｃ２）基因型为６．７％；ｌ叮对照组ｒｆｌＡ（ＣＩ／Ｃ１）基凶型为４４．４％，Ｂ（Ｃ１／Ｃ２）基因型占４８．９％，Ｃ（Ｃ２／Ｃ２）基因型为６．７％。Ａ（Ｃ１／Ｃ１）基因型在病例组和对照组中存在显著性差异；携带Ａ型的个体发生食管癌的危险性，比携带ｃ型的个体高５倍以上。同样Ｔａｎ等人ｏ¨１对林县的１５０例食管癌患者和１５０正常人作病例一对照研究，结果显示，ＣＹＰ２Ｅ１ＣＩ／Ｃ１野生型等位基因频率在两组中分别为７１．３％和４４．０％，差异有显著性。本研究对南京周围地区人群的结果显示，食管癌组中Ａ（Ｃ１／ｃ１）基凶型为６１．５％，Ｂ（Ｃ１／Ｃ２）基网型占３０．８％，Ｃ（Ｃ２／Ｃ２）基因型为７．７％；而对照组中Ａ（Ｃｌ／Ｃ１）基因型为５０．８％，Ｂ（Ｃ１／Ｃ２）基因型占３５．６％，Ｃ（Ｃ２／Ｃ２）基因型为１３．６％。Ａ（ＣＩ／Ｃ１）基因型在病例组和对照组中差异尚未达到显著性的程度（ｘ２＝２．１７０，Ｐ＝０．１４１）。各基因型与上述研究结果存在明显差异，而与Ｇａｏ等人‘１６］对江苏淮安１４０例病历和２２９例对照人群的结果相似，其研究表明，ＣＹＰ２Ｅ１ＣＩ／Ｃｌ野生型等位基因频率在两组中分别为５９．３％和６１．１％，差异无显著性。说明ＣＹＰ２Ｅ１基因ＲｓａＩ酶切多态性存在地域差异。此外，本研究显示，Ｃ１和Ｃ２等位基因频率分别是６８．６％、３１．４％，而欧美人群ｃ１等位基因频率明显高于中国人群，ｃ２等位基因频率则明显低于中国人群‘１７】。这提示ＣＹＰ２Ｅ１基因ＲｓａＩ酶切多态性具有明显的种族差异。南京医科人学碗Ｉ．学位论文对ＣＹＰ２Ｅ１基因ＤｒａＩ酶切多态性与食管癌易感性的研究结果够示，食管癌组巾ＤＤ基因型为５９．Ｏ％，ＣＤ基凶犁占３４．６％，ＣＣ基因型为６．４％；而对照组巾ＤＤ基因型为５２．５％，ＣＤ基凶型占４０．７％，ＣＣ基冈型为６．８％。ＤＤ基因型在病例组和对照组中差异尚未达到显著性的程度（ｘ２＝０．７８５，Ｐ＝０．３７６）。Ｌｉｎ等人１１４１对河南林县人群以及瞿永华等人‘１８１对上海和哈尔滨人群ＣＹＰ２Ｅ１基因ＤｒａＩ酶切多态性的研究结果均与本研究类似。该基因酶切位点的多态性未发现存在明显地域差异，同样亦未发现明显种族差异‘１９】。食管痛病例组中吸烟、饮酒者均明显多于对照组，病例组中分别为５１．３％和３４．６％，而对照组中则为２５．４％和７．６％，均存在显著性差异。吸烟者患食管癌的危险性是非吸烟者的的３倍多（ＯＲ＝３．１）；饮酒者患食管痛的危险性是其他人的６倍以上（ＯＲ＝６．４）。ＣＹＰ２Ｅ１为Ｉ相代谢酶基冈，它可以参与烟、酒等致癌物的代谢，因而该基因的多态性与吸烟、饮酒之间可能存在协同致癌性，但本研究未发现它们之问存在协同作用，一方面，可能与本研究的病例数较少有关；另一方面，可能由于对致癌物的代谢与多种代谢酶相联系，其间关系错综复杂，相互影响有关。南京医利犬学硕１一学位论文小结１．ＣＹＰ２Ｅ１基因Ｃ１／Ｃｌ基因型在食管癌病例中的分布频率为６１．５％，高于对照组的５０．８％，但尚未达剑显著性差异程度（Ｘ２＝Ｏ．７８５，Ｐ＝０，３７６）。与Ｌｉｎ等人和Ｔａｎ等人对河南林县的研究存在差异，表明ＣＹＰ２Ｅ１基冈ＲｓａＩ多念性存在地域差异。Ｃ１和Ｃ２等位基因频率分别是６８．６％、３１．４％，而欧美人群Ｃ１等位基因频率明显高于ｔ卜国人群，Ｃ２等位基因频率则明显低于中国人群。这提示ＣＹＰ２Ｅ１基因ＲｓａＩ酶切多态性具有明显的种族差异。２．对于ＣＹＰ２Ｅ１基因Ｄｒａｌ酶切多态性，食管癌组中ＤＤ基因型为５９．Ｏ％，而对照组中ＤＤ基因犁为５２．５％。ＤＤ基因型在病例组和对照组中差异无显著性（ｘ２＝Ｏ．７８５，Ｐ＝０．３７６）。Ｌｉｎ等人对河南林县人群以及瞿永华等人对上海和哈尔滨人群ＣＹＰ２Ｅ１基因Ｄｒａｌ酶切多态性的研究结果均与本研究类似。该基因酶切位点的多态性未发现存在明显地域差异，同样亦未发现明显种族差异。３．食管癌病例组中吸烟、饮酒者均明显多于对照组，病例组中分别为５１．３％和３４．６％，而对照组中则为２５．４％和７．６％，均存在显著性差异。吸烟者患食管癌的危险性是非吸烟者的的３倍多（ＯＲ＝３．１）；饮酒者患食管癌的危险性是其他人的６倍以上（ＯＲ＝６．４）。４．ＣＹＰ２Ｅ１为Ｉ相代谢酶基因，它可以参与烟、酒等致癌物的代谢，因而该基因的多态性与吸烟、饮酒之间可能存在协同致癌性，但本研究未发现它们之间存在协同作用。南京医科人学坝Ｌ学位论文第二部分谷胱甘肽转硫酶Ｐｌ基因多态性与食管癌遗传易感性的关系的探讨食管癌的发生足遗传因素和环境因素协同作用的结果，个体对环境致痛物的代谢不仅有ｌ相代谢酶参与，ＩＩ相代谢酶也是参与致癌物代谢的重要组成部分。谷胱目一肽转硫酶（ＧＳＴ）属ＩＩ相代谢酶，能催化亲电子致癌物与谷胱甘肽结合，形成易溶于水的化合物排除体外，是与毒物或致癌物解毒代谢有关的酶类。ＧＳＴｓ存在于多种物种组织中，而在消化系统上皮组织中有相对较大量的存在，在正常食管上皮中，ＧＳＴＰｌ是重要的一种ＧＳＴｓ业型，至少从数量而言‘２０１，因而推想ＧＳＴＰｌ编码酶的活性的高低可能与肿瘤的发生有关。ＧＳＴＰｌ也具有基凶多态性，该基因第５外显子的Ａ．Ｇ突变可导致基因产物的活性和对底物特异性发生改变‘２１Ｉ。因此ＧＳＴＰｌ基因的多态性可能影响肿瘤的易感性。为进一步研究和验证ＧＳＴＰｌ基因多态性与食管痛遗传易感性的关系，我们运用多聚酶链反应．性片段长度多态性（ＰＣＲ．ＲＦＬＰ）技术，在南京周围地区的人群中进行了病例．对照分子流行病学研究。研究对象和方法一、研究对象：病例和对照的选择方法同第一部分。二、方法流行病学调查方法、主要试剂、仪器以及ＤＮＡ提取方法均与论南京医科火学倾十学位论文文第一部分相同。三、ＧＳＴＰＩ基凶多态性检测：（１）基冈组ＤＮＡ的提取同第一部分。（２）引物设计参照文献设计ＧＳＴＰＩ基因的扩增引物，由加拿大上海Ｓｏｎｇｏｎ公司合成。ＧＳＴＰｌ基冈ＢｓｍＭ酶切位点的引物序列为‘２２Ｊ：Ｐｒｉｍｅｒｌ：５＂－ＡＣＣＣＣＡＧＧＧＣＴＣＴＡＴＧＧＧＡＡ．３、Ｐｒｉｍｅｒ２：５＂－ＴＧＡＧＧＧＣＡＣＡＡＧＡＡＧＣＣＣＣＴ－３、（３）ＰＣＲ扩增反应体系ＧＳＴＰｌ基冈ＰＣＲ体外扩增反应体系同第一部分。（４）ＰＣＲ过程１）在０．５ｍｌ的离心管中依次加入上表巾（Ｔａｑ酶除外）的试剂，混匀，高速瞬时离心。２）丁－冰水浴中加入Ｔａｑ酶２．０Ｕ，混匀，高速瞬时离心。３）于９４０Ｃ预变性５分钟４）按９４０Ｃ变性３０秒，６１０Ｃ复性３０秒，７２０Ｃ延伸３０秒，进行３５个循环后，于７２０Ｃ延伸１０分钟。５）ＰＣＲ产物的检测：配制１％的琼脂糖凝胶（称取０．５９琼脂糖，加５０ｍｌＴＡＥ溶解，在微波炉上加热成溶胶，加入３ｕｌ配好的溴乙锭），取９ｕｌ扩增产物与ｌｕｌ溴酚兰上样液混匀后加样。于ＴＡＥ缓冲液中，８０Ｖ电泳约３０分钟，用紫外透射仪观察扩增条带。（５）ＧＳＴＰｌ基因的扩增产物用ＢｓｍＡＩ性内切酶进行酶切，酶切南京医科大学坝ｉ“学位论文体系和酶切反应操作方法与第一部分相同。（６）性片段长度多态性检测：ＧＳＴＰｌ基冈ＢｓｍＡ］酶切位点扩增片段长度为１７６ｂｐ，扩增产物经ＢｓｍＡＩ内切酶消化后分为三种基因犁：纯合子野生型（１ａ／ｌａ）型、Ｂ杂合子犁（１“ｌｂ）型、Ｃ纯合予突变型（１ｂ／ｌｂ）型。其中ｌａ／１ａ型不能被ＢｓｍＡＩ内切酶消化，只有１７６ｂｐ的片段出现，ｌａ／ｌｂ型日ｊ被ＢｓｍＡＩ内切酶消化成１７６ｂｐ、９１ｂｐ、８５ｂｐ、的片段，ｌｂ／ｌｂ型被ＢｓｍＡＩ内切酶完全消化，为８５ｂｐ和９１ｂｐ的片段，如下图所示：１２３４ＭＳ６７图１．１ＰＣＲ扩增的ＣＹＰ２Ｅ！基因片段经ＲｓａＩ性酶切后的琼脂糖凝胶电泳图谱Ｍ泳道为ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１．３．５．６泳道为ｌａ／１ａ纯合子；４．７泳道为１“１ｂ杂合子；２泳道为１ｂｌｌｂ纯合子。四、ＧＳＴＰｌ基因多态性与食管癌关系的资料分析和数据统计方法同第一部分。结、果遗传、Ｆ衡检验为了检验人群的ＧＳＴＰｌ基因性频率是否达到了Ｈａｒｄｙ—Ｗｅｉｎｂｅ唱遗传平衡，对对照组人群的基因型频率进行了遗传平衡检验。将观察得到的１ａ和１ｂ等位基因频率代入基因型的平衡频率（Ｐ２，２ｐｑ，ｑ２），冉乘以总人数得到预期基因型分布，然后与实际数进行卡方检验。结果表明，观察值和预期值无统计学显著差异（ｘ２＝０．０００，ｄｆ＝２，Ｐ＝Ｉ），说明基因型频率已达到遗传平衡，具有群体代表性（如表１．１所示）。表１．１正常人群ＧＳＴＰｌ基因ＢｓｍＡＩ位点遗传平衡检验４等位基凶频率：１ａ＝（７６×２＋３７）／２３６＝０．８０ｌ１ｂ＝（５×２＋３７）／２３６＝０．１９９Ｘ２＝０．０００，ｄｆ＝２，Ｐ＝Ｉ二、ＧＳＴＰｌ基因多态性分析食管癌组和对照组ＧＳＴＰｌ基因ＢｓｍＡＩ位点各基因型分布如表１．２和图１．１所示，ＧＳＴＰｌ基因ＢｓｍＡＩ位点各基因型在食管癌病例组中的分布频率分别为１ａ／１ａ型６６．７％、ｌｄｌｂ型２８．２％、１Ｎｌｂ型５．１％，在对照组分布频率分别为１“１ａ型６４．４％、１ａ／１ｂ型３１．４％、ｌｂ／ｌｂ型４．２％，各基因型在食管癌组和对照组中分布的差异无显著性１’带京医科大学钡卜学位论文（Ｘ２＝Ｏ．１０６，Ｐ＝０．７４５）。ｌａ等位基因在病例中的分布频率为８０．８％，刈‘ｊ强为８０．１％，也无显著性差异（Ｘ２＝Ｏ．０２８，Ｐ＝０．８６７）。表１．２食管癌病例和对照ＧＳＴＰｌ皋冈ＢｓｍＡｌ位点各基斟型分布病例列照５２（６６．７％）２２（２８．２％）４（５．１％）７６（６４．４％）３７（３１．４％）５（４２％）Ｐ－０．７４５１２６（８０．８％）３０（１９．２％）１８９（８０．１％）４７（１９．８％）Ｘ２＝Ｏ．０２８Ｐ＝０．８６７统计结果Ｘ２＝０．１０６ｌ彰』３食管癌病例和对照ＧＳＴＰｌ基因ＢｓｍＡＩ位点各基因型分都㈧０４０．２０２三、Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析１．单因素条件Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析如表１．３所示，单因素条件Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析与食管癌发生有关联的因素（Ｐ（０．０５）有：吸烟（ＯＲ＝３．１）和饮酒（ＯＲ＝６．４）；而年龄、性别、Ｒｓａｌ位点的多态性、ＤｒａＩ位点的多态性、ＢｓｍＡＩ位点的多态性均未发现与食管癌的发生有显著相关。表１．３单因素条件Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析Ｖａｒｉａｂｌｅ８Ｏ．００５Ｓ．Ｅ．ＰＯ．０１９Ｏ．７７９ＯＲ（９５％ＣＩ）０．９９５（０．０．９５８－１．０３３）一——————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————一年龄————————————＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿－＿＿－＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿●＿＿＿＿＿＿－＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿－＿＿＿＿＿＿＿＿一——一性别０．４９４１．１２７１＿８５８０．４３６０．２６１０．１０００．３１１Ｏ＿３１０Ｏ．４２ｌ０．２９７０．２９５０．３０８Ｏ．１１２＜Ｏ．０ｌ＜０．０ｌ０．１４１０．３７６０．７４５翌堡堕型叁堂竺』．兰丝堡苎０．６１０（０．３３２．１．１２２）３．０８８（１．６８２．５．６６７）６．４１２（２．８１１．１４．６２２）１．５４７（０．８６４—２．７６７）１．２９８（０．７２８—２．３１４）１．１０５（０．６０５。２．０２０）吸烟饮洒ＲｓａＩＤｒａＩＢｓｍＡｌ２．多阂素条件Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析考虑到各因素之间可能存在联系或混杂作用，采用条件Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归模型进行多因素分析。选择在单因素条件Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析中Ｐ值小于或接近０．０５的变量（性别、吸烟、饮酒、ＲｓａＩ位点和ＤｒａＩ），采用向后删除法，以０．１５作为选入和剔除变量的显著性水平，作多冈素条件Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析，结果如表１．４所示：吸烟、饮洒以及ＣＹＰ２Ｅ１基因ＲｓａＩ位点的多态性等因素进入模型，是食管癌发生的危险因素，其优势比分别为１．９０５、５．２２３和１．８１７。表１．４多因素条件Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析四、ＧＳＴＰｌ基因多态性与吸烟、饮酒间的相互作用关系如表１．５所示：我们以既为ＧＳＴＰｌｌａ／１ａ基凶犁义不吸烟的个体为参照，在考虑饮酒剀素的同时，分析ＧＳＴＰＩ各基闲型与吸烟的相互作用，结果显示变异基凶型或吸烟单“冈素的优势比（ＯＲ）分别为２．０１６和３．１６７，而既吸烟又携带ＧＳＴＰＩ变异基凶型的个体的优势比为０．７１９；同样在考虑吸烟因素的情况Ｆ，分析ＧＳＴＰｌ各基因型与饮酒的相互作用，不携带ｌａ／ｌａ基因型且饮滔的个体与参照相比，其优势比为１．０１６。表明ＧＳＴＰｌ基冈的多态性与吸烟、饮酒的联合对食管癌易感性无协同作用。表１．５ＣＹＰ２Ｅ１基因多态性和吸烟相互作用与食管癌的危险性五、ＣＹＰ２Ｅ１基因、ＧＳＴＰｌ基因多态性的联合作用与食管癌的危险南京医科人学碳Ｌ学位论文性的关系如表１．６所示，携带ＣＹＰ２Ｅ１Ｃ１／Ｃ１基因型和ＧＳＴＰｌ１ａ／１ｂ＋ｌｂ／１ｂ基冈型的个体与对照相比，其优势比为１．５００，而ＣＹＰ２Ｅ１ＣＩ／Ｃ１基因型、ＧＳＴＰＩ１ａ／１ｂ＋ｌｂ／１ｂ基因型单一因素的优势比分别为０．９０９、０．６４３，ｌａ／１ｂ＋ｌｂ／ｌｂ说明二者无协同作用。同样ＣＹＰ２Ｅ１ＤＤ基因型与ＧＳＴＰＩ基因型亦无协同作用。表１．６ＣＹＰ２Ｅ１基凶和ＧＳＴＰｌ基因联合作用与食管癌的关系南京医科大学碗Ｌ学位论义讨论机体对外来化合物的代谢过程包括Ｉ相反应和ＩＩ相反应，Ｉ相反应主要对外来化合物进行生物转化，１１相反应则对１相反应代谢活化所产生的亲电子中间体与体内的化合物进行结合反应。谷胱甘肽转硫酶（ＧＳＴ）属ＩＩ相代谢酶，它是由肽链组成的二聚体，可催化致痛原于谷胱甘肽问的结合反应，从而使致癌原解毒，形成水溶性化合物排出体外。除此之外，ＧＳＴ还具有对其他酶或蛋白的调节作用，参与ＤＮＡ的修复。凶而ＧＳＴ有助于维持细胞基冈组的完整性，他们的变异和多态性会影响到个体对肿痛的易感性。ＧＳＴＰｌ是重要的一种ＧＳＴｓ＿！哑型，主要参与代谢烟草中的致癌物，它可以存在于许多组织中，在正常食管上皮中有相对大量的存在。ＧＳＴＰｌ第５外显子发生Ａ—Ｇ的替换，可导致合成的第１０５位氨基酸由原来的异亮氨酸变为缬氨酸，而异亮氨酸是该酶疏水底物结合位点的８个氨基酸之一，因而该位点的变异会引起对底物亲和力和代谢活性的改变［ｚ３，２４］，文献提示该位点的多态性可能与食管癌的易感性有关。目前国内外对该基因多态性的研究结论尚不～致，可能与选择研究人群不同有关。如Ｗａｎｇ等人和Ｔａｎ等人研究认为ＧＳＴＰｌ基因的多态性与食管癌的易感性无关１２５，１５１，而ｖａｌｌＬｉｅｓｈｏｕｔ等人和Ｌｅｅ等人的研究则持不同结论１２６，２７１。在本研究中未能证实ＢｓｍＡＩ位点的多态性与食管癌的危险性有关，其优势比为１．１；在病例一对照研究中其差异无显著性（ＸＺ＝０．１０６，Ｐ＝０．７４５＞０．０５）。该基因酶切位点的多态性未发现存在明显地域差异，同样亦未发现明显种族差异‘１４，２８１。南京医科人学硕卜学位论文奉研究多凶素Ｌｏｇｉｓｔｉｃ同归分析表明，ＣＹＰ２Ｅ１基因ＲｓａＩ位点的多念性、吸烟、饮酒为食管癌的危险因素，其优势比分别是１．８１７、１．９０５和５．２２３。其它如年龄、性别、ＣＹＰ２Ｅ１基凶ＤｒａＩ位点的多态性、ＧＳＴＰｌ基凶ＢｓｍＡＩ位点的多态性均不是食管癌的危险因素。ＧＳＴＰｌ为ＩＩ相代谢酶基因，它可以参与烟、酒等致癌物的代谢。烟、洒等前致癌物，被Ｉ相酶代谢激活后成为有活性的致癌物，而活化的致癌物町被ＩＩ相酶解毒，因而该基因的多态性与吸烟、饮酒之间可能存在协同致癌性，但本研究未发现它们之问存在协同作用。一方面，可能与本研究的病例数较少有关；另一方面，可能由于对致癌物的代谢与多种代谢酶相联系，且需经过Ｉ相代谢酶过程，其间关系错综复杂，相互影响较多。前致痛物经Ｉ相代谢酶活化成致癌物，这些活化产物随后又可被ＩＩ相代谢酶所灭活，因而Ｉ相、ＩＩ相代谢酶活性间的平衡与个体对环境中的化学致癌物、致突变物的易感性相关。携带ＣＹＰ２Ｅ１Ｃ１／Ｃ１基冈型和ＧＳＴＰｌｌａ／ｌｂ＋ｌｂ／ｌｂ基因型的个体与对照相比，其优势比为１．５００。而ＣＹＰ２Ｅ１Ｃ１／Ｃ１基因型、ＧＳＴＰｌｌａ／ｌｂ＋ｌｂ／ｌｂ基因型单一因素的优势比分别为０．９０９、Ｏ．６４３，未发现二者间存在明显协同作用。同样，ＣＹＰ２Ｅ１ＤＤ基因型与ＧＳＴＰｌｌａ／ｌｂ＋ｌｂ／ｌｂ基因型亦无协同作用。南京医科大学硕Ｌ学位论文小结１．ＧＳＴＰＩ基因１ａ／ｌａ基因型在食管癌病例中的分布频率为６６．７％，对照组１ａ／１ａ基因基因型频率为６４．４％，差异无硅著性（ｘ２＝Ｏ．１０６，Ｐ＝０．７４５＞０．０５）。２．各凶素Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析表明，ＣＹＰ２Ｅ１基因Ｒｓａｌ位点的多态性、吸烟、饮酒为食管癌的危险因素，其优势比分别是１．８１７、１．９０５和５．２２３。其它如年龄、性别、ＣＹＰ２Ｅ１基因ＤｒａＩ位点的多态性、ＧＳＴＰｌ基因ＢｓｍＡＩ位点的多态性均不是食管癌的危险因素。３．前致癌物经Ｉ相代谢酶活化成致癌物，这些活化产物随后又可被ＩＩ相代谢酶所灭活，因而Ｉ相、ＩＩ相代谢酶活性间的平衡可能与食管癌的易感性有关。但本研究未发现ＣＹＰ２Ｅ１基因多态性和ＧＳＴＰｌ基凶多态性之间存在协同作用；同样未发现ＧＳＴＰｌ基因多态性与吸划、饮酒等环境因素问存在协同致癌性。南京医科人学倾。扣学位沦殳参考文献：１．ＧｕｅｎｇｅｒｉｃｈＦＲＫｉｍＤＨ，１ｗａｓａｋｉｍ．ＲｏｌｅｏｆｈｕｍａｎｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ一４５０ＩＩＥ１ｉｎｔｈｅｏｘｉｄａｔｉｏｎｏｆｍａｒｙｌｏｗｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｃａｎｃｅｒｓｕｓｐｅｃｔｓ．ＣｈｅｍＲｅｓＴｏｘｉｃｏｌ，１９９１，４：１６８—１６９２．ＨｉｌｗｏｎｅｎＡ，Ｈｕｓｇａｆｖｅｌ—ＰｕｒｓｉａｉｎｅｎＫ，ＡｎｔｔｉｌａＳ，ｅｔａｌ。ＴｈｅｈｕｍａｎＣＹＰ２Ｅ１ｇｅｎｅａｎｄｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ：ＤｒａＩａｎｄＲｓａＩｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ１４：８５—８８．ｉｎａＦｉｎｎｉｓｈｓｔｕｄｙ．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，１９９３，３．ＰａｒｋａＴ，ＬｅｅＯＹ，ＫｗｏｎＳＪ，ｅｔａ１．ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＣＹＰ２Ｅ１ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｅｔｉｃｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｔｏｇａｓｔｒｉｃＫｏｒｅａｎｓ．ＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ４．ＫａｔｏｃａｎｃｅｒｉｎＨｅｐａｔ０１．２００３，１８（１１）：１２５７—６３Ｎ，ｅｔａ１．ＧｅｎｅｔｉｃｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓｏｆｃａｎｃｅｒＳ，ＴａｊｉｒｉＴ，Ｍａｔｓｕｋｕｒａａｌｄｅｈｙｄｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ２，ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅｐ４５０２ＥｌｆｏｒｌｉｖｅｒｉｎＨＣＶａｍｉｂｏｄｙ—ｐｏｓｉｔｉｖｅｒｉｓｋｊａｐａｎｅｓｅｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄｔｈｅｖａｒｉａｔｉｏｎｓｏｆＣＹＰ２Ｅ１ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｉｎｔｈｅｌｉｖｅｒｄｕｅｔｏｉｔｓｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍＳｃａｎｄＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒ０１．２００３，３８（８）：８８６—９３Ｈ，Ｃｈｅｎ５．ＷａｎｇＳＬ，ＬｅｅＫＷ，ｅｔｃａｎｃｅｒａ１．ＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０２Ｅ１ｇｅｎｅｔｉｃｉｎａｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓａｎｄｌｕｎｇＣａｎｃｅｒ．１Ｔａｉｗａｎｅｓｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ｌｕｎｇ９９９，２６（１）：２７—３４６．ＹｏｎＫ，ＪｏｓｅｆＡ，ＶｏｌｋｅｒＨ，ｅｔａ１．ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆＣＹＰｌＢｌｃｏｄｏｎ４３２ｍｕｔａｎｔａｌｌｅｌｅｉｎｈｅａｄａｎｄｎｅｃｋｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｓｏｍａｔｉｃｍｕｔａｔｉｏｎｓｏｆＰ５３ｉｎｃａｎｃｅｒｉｓｒｅｆｌｅｃｔｅｄｂｙＲｅｓ，２００１，ｔｕｍｏｒｔｉｓｓｕｅ．Ｃａｎｃｅｒ南京医科人学坝．｛’学位论文６１：４３９８—４４０４７．ＡｋｉｒａＹ＇ＨｏｉｃｈｉＫ，ＴｅｔａｕｊＹ，ｅｔａ１．ＧｅｎｅｔｉｃｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓｏｆａｌｃｏｈｏｌａｎｄａｌｄｅｈｙｄｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓａｎｄｇｌｕｔｏｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＭ１ａｎｄｄｒｉｎｇ，ｓｍｏｋｉｎｇａｎｄｄｉｅｔｉｎＪａｐａｎｅｓｅｍｅｎｗｉｔｈｅｓｏｐｈａｇｅａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，２００２，２３：１８５１－９．８．ＹｕＭＷ，Ｇｌａｄｅｋ－ｙａｒｂｏｒｏｕｇｈＡ，ＣｈｉａｍｐｒａｓｅｒｔＳ，ｅｔａ１．ＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅａｎｄｔｏＰ４５０２Ｅ１ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＭ１ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓａｎｄｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｌ２６６—１２７３．ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１９９５，１０９９．ＭａｒｉｏＵＯ，ＭｃｈｒｉｄｅＷ，ＹａｎｇＣＳ，ｅｔａ１．ＨｕｍａｎＥｔｈａｎｏｌ—ＩｎｄｕｃｉｂｌｅＰ４５０ＩＩＥｌ；ｃｏｍｐｌｅｔｅｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅ，ｐｒｏｍｏｔｅｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｍａｐｐｉｎｇ，ａｎｄｃＤＮＡ—ｄｉｒｅｃｔｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１９８８，２７：９００６—９０１３．１０．ＨａｙａｓｈｉＳＩ，ＷａｔａｎｂｅＪ，ＫａｗａｊｉｒｉｒｅｇｉｏｎｃｈａｎｇｅＫ．Ｇｅｎｅｔｉｃｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓｉｎ５ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｆｌａｋｉｎｇｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｈｕｍａｎｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０２Ｅ１ｇｅｎｅ．ＪＢｉｏｃｈｅｍ，１９９１，１１０：５５９—５６５１１。林东昕，唐永明，彭琼等。细胞色素Ｐ４５０２ＥＩ和谷胱甘肽转硫酶Ｐ１基因与食管癌易感性。中华肿瘤杂志，１９９８，２０（２）：９４—９７。１２．王晓斌，刘国仰。有关内含子功能研究的新进展。中华医学遗传学，２０００，１７：２１１—２１２。１３．ＴｏｓｉＭ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒｇｅｎｅｔｉｃｓｏｆＣ１ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ．Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９８，１９９：３５８—３６５．４２南京医利火学硕卜学位论文１４．ＬｉｎＤＸ，ＴａｎｇＹＭ，ＰｅｎｇＱ，ｅｔａ１．ＳｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｔｏｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒａｎｄｇｅｎｅｔｉｃｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓｉｎｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓＴ１，Ｐ１，ａｎｄＭ１ａｎｄｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０２Ｅ１．ＣａｎｃｅｒＥｐｉｄｅｍｉｏｌＢｉｏｍａｒｋｅｒｓＰｒｅｙ１９９８，７（１１）：１０１３－８．１５．ＴａｎｉｎｏｆＧＱ，ｅｔａｌ。ＩｍｐａｃｔｇｅｎｅｔｉｃｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓＷ：ＳｏｎｇＮ，ＷａｎｇｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０２ＥｌａｎｄｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ４ｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓｏｎＭＩ，Ｔ１，ａｎｄＰ１ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｔｏｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒａｍｏｎｇｈｉｇｈ—ｒｉｓｋｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓｉｎＣｈｉｎａ．ＣａｎｃｅｒＥｐｉｄｅｍｉｏｌＢｉｏｍａｒｋｅｒｓ１６．ＧａｏＣ，ＴａｋｅｚａｋｉＰｒｅｖ．２０００，９（６）：５５１－６．Ｔ，ＷｕＪ，ｅｔａ１．ＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ－４５０２ＥｌｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓａｎｄｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｆａｃｔｏｒｓｗｉｔｈｒｉｓｋｏｆｅｓｏｐｈａｇｅａｌａｎｄｓｔｏｍａｃｈｃａｎｃｅｒｓｉｎＣｈｉｎｅｓｅ．ＣａｎｃｅｒＥｐｉｄｅｍｉｏｌＢｉｏｍａｒｋｅｒｓＰｒｅｖ２００２，１１（ｊ）：２９—３４．１７．ＨｉｒｖｏｎｅｎＡ，ＫｉｒＳｔｉＨＰ，ＳｉｓｋｏＡ，ｅｔａ１．ＴｈｅｈｕｍａｎＣＹＰ２Ｅ１ｇｅｎｅａｎｄｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ：ＤｒａＩａｎｄＲｓａＩｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓｉｎａＦｉｎｎｉｓｈｓｔｕｄｙｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，１９９３，１４（１）：８５—８８１８．瞿永华，石于波，钟礼杰等。细胞色素Ｐ４５０２Ｅ１（ｃＹＰ２Ｅ１）的遗传多态性与非吸烟女性肺癌的危险性。癌变畸变突变，１９９８，１０（６）：３５５．３５８。１９．ＬｅＭａｒｃｈａｎｄＬ，ＳｉｖａｒａｍａｎＬ，ＰｉｅｒｃｅＬ，ｅｔａ１．ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓｏｆＣＹＰ１Ａ１，ＧＳＴＭ１，ａｎｄＣＹＰ２Ｅ１ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｓｕｇｇｅｓｔｃｅｌｌｔｙｐｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｉｅｓｔｏｔｏｂａｃｃｏｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｓ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ１９９８，５８（２１）：４８５８—６３４３南京医科大学倾Ｌ学位论文２０．ＥｓｔｈｅｒＭＭ，ｖａｎＬｉｅｓｈｏｕｔ，ＨｅｎｎｉｅＭＪ，ｅｔａ１．Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｔｏｏｆｔｈｅｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｓ—ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＰ１ａｎｄｉｔｓｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｂａｒｒｅｔｔ、ｓｅｓｏｐｈａｇｕｓａｎｄｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，１９９９，５９：５８６—５８９２１．ＺｉｍｎｉａｋＰ’ＮａｎｄｕｒｉＢ，ＰｉｋｕｌａＳ，ｅｔａ１．ＮａｔｕｒａｌｌｙｏｃｃｕｒｒｉｎｇｈｕｍａｎｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｖａｌｉｎｅａｔＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＧＳＴＰ１，１ｉｓｏｆｏｒｍｓｗｅｔｈｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅａｎｄＪＢｉｏｃｈｅｍ，ｉｎ１０４ｄｉｆｆｅｒｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．Ｅｕｒｅｎｚｙｍａｔｉｃｐｏｓｉｔｉｏｎ１９９４，２２４：８９３—８９９．２２．ＨａｒｒｉｅｓＬＷ，ＳｔｕｂｂｉｎｓＭＪ，ＦｏｎｎａｎａｔＤ，ｅｔａ１．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｅｔｉｃｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓｔｈｅｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｐｉｌｏｃｕｓａｎｄａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｗｉｔｈｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｔｏｂｌａｄｄｅｒ，ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒａｎｄｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒ・Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｓｉｓ，１９９７，１８：６４１・６４４．２３．ＨｕＸ，ＪｉＸ，ＳｒｉｖａｓｌａｖａＳＫ，ｅｔａ１．ＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｃａｔａｌｙｔｉｃｆｏｒｍｓｏｆｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｔｗｏｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｈｕｍａｎｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＰ１．１ｉｎｔｈｅｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎｏｆｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃｄｉｏｌｅｐｏｘｉｄｅｏｆｃｈｒｙｓｅｎｅ．ＡｒｃｈＢｉｏｃｈｅｍ２４．Ａｌｉ．ＯｓｍａｎＦ，ＡｋａｎｄｅＢｉｏｐｈｙｓ．１９９７，３４５（１）：３２－８・Ｇ，ｅｔａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇｏｆｆｕｌｌ－ｌｅｎｇｔｈＯ，ＡｎｔｏｕｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄｗｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉｃＤＮＡｓｏｆｔｈｒｅｅｈｕｍａｎｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｐｉｇｅｎｅｖａｒｉａｎｔｓ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，１９９７，２７２：１０００４—１００１２．２５．ＷａｎｇＬＤ，ＺｈｅｎｇＳ，ＬｉｎＢ，ｅｔｔｏａ１．ＣＹＰｌＡｌ，ＧＳＴｓａｎｄｍＥＨｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓａｎｄｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｆｒｏｍａｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ：Ｓｔｕｄｙｏｆａｒｅａｈｉｇｈ－－ｉｎｃｉｄｅｎｃｅｉｎｎｏｒｔｈＣｈｉｎａ．ＷｏｒｌｄＪ南京医科大学硕ｌ学他ｉ｛｛色叟－＿———————－＿＿＿＿＿—＿＿＿＿＿—————————－－●－＿＿＿＿＿●＿＿－＿＿－———————————－－＿＿＿—————————Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００３，９（７）：１３９４－７２６．ＬｅｅＪＭ，Ｌｅｅａｎｄｏｆａ１．Ｇｅｎｅｔｉｃｐ５３ＳＹ，ｅｔｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓＹＣ，ＹａｎｇｎｏｔＧＳＴＰ１，ｂｕｔＮＡＴ２，ａｒｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙＪＣａｎｃｅａｔｏｓｑｕａｍｏｕｓ—ｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａｏｆｔｈｅｅｓｏｐｈａｇｕｓ．Ｉｎｔ２０００，８９（５）：４５８—６４．２７．ＶａｎＬｉｅｓｈｏｕｔｏｆＥＭ，ＲｏｅｌｏｆｓＨＭ，ＤｅｋｋｅｒＳ，ｅｔａ１．ＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｔｈｅｔｏｅｘＤｒｅｓｓｉｏｎｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅａｎｄＰ１ｇｅｎｅａｎｄｉｔｓｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙＣａｎｃｅｒＲｅｓ．１Ｂａｒｒｅｔｔ＇ｓｅｓｏｐｈａｇｕｓｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ・９９９，５９（３）：５８６—９．ｏｆＧＳＴＭｌ，ＬＭ，ｅｔａ１．ＦｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓＤＣ，Ａｍｏｒｉｍａ２８．ＲｏｓｓｉｎｉＡ，ＲａｐｏｚｏＧＳＴＴ１，ａｎｄＧＳＴＰ１ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓｉｎＢｒａｚｉｌｉａｎｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．ＧｅｎｅｔＭｏｌＲｅｓ．２００２，１ｆ３）：２３３—４０．４５南京医科人学顾｛。学位论史致谢首先，我要感谢我的导师施瑞华副教授和赵志泉教授。他们在课题的选择、经费的落实、实验室条件和实验指导等各方面都给了我极大的帮助，使得课题得以顺利完成。两位导师还精心安排我从事必要的临床工作和内镜学习，使我在实践中受益非浅。他们对科学研究的严谨态度、对工作的极端负责的精神和高尚的医德医风将是我终生学习的榜样。感谢中心实验室陈子庆副主任、崔毓贵副教授、苏恩本副教授、杜青、Ⅲ＿小健老师在实验工作的大力支持和无私帮助，使得实验得以顺利完成。感谢统计教研室陈峰教授、易洪刚研究生在数据统计方面的无私指导和帮助。感谢消化科的张小勇主任、林琳副主任、陈小星副主任、孙茂华主任医师、黄霞王月丰任医师、张国新、于莲珍、张红杰、徐顺福、李学良等副主任医师、王颍、曹洋等老师在我标本收集和临床学习期问予以的指导和帮助。感谢许迎红、丁霞芬、林征护士长以及全体护理部老师在标本采集和学习中给予的大力帮助。还耍感谢消化科实验室王弘娣、郝波老师予以的帮助。感谢所有对我的学习与实验给予帮助的同学和朋友。最后，我要感谢父母在学习生活中予以的照顾和帮助。南京医利大学颁｛。学位论文基因的多态性和食管癌的易感性南京医科大学第一附属医院消化内科（２１００２９）王伟综述施瑞华赵志泉审校摘要：食管癌的癌变机制仍不清楚，值得关注的是遗传因素在食管癌发生中起的作用，本文主要介绍参与致癌物代谢的相关基因（ＣＹＰ、ＡＤＨ、ＧＳＴ、ＡＬＤＨ、ＮＡＴ）、与ＤＮＡ稳定性有关的基因（ＭＴＨＦＲ、ＸＲＣＣｌ、ＨＯＧＧｌ）以及某些抑癌基因（Ｐ５３），探讨它们的多态性与食管癌的易感性关系。关键词：多态性、易感性、食管癌食管癌是常见的消化系统恶性肿瘤之一，我国亦是该病的高发围家，然其癌变机制仍不清楚。食管癌的发生有明显的个体差异，即使在高风险地区也只有少数人发病，而且食管痛的发生有家族聚集性，提示遗传因素在食管癌的发生中起重要作用。目前许多研究【Ｅ试图寻找相关基因，尤其是易感基因，以阐明食管癌的遗传易感性和痛变机制。本文将对食管癌易感基因的研究作一。综述。１．参与致癌物代谢的易感基因机体对外来化合物的代谢过程包括Ｉ相反应和ＩＩ相反应，Ｉ相反应主要对外来化合物进行生物转化，ＩＩ相反应则对Ｉ相反应代谢活化所产生的亲电子中间体与体内的化合物进行结合反应，从而使其失活并增加其水溶性。绝大多数致癌物为前致癌物，需被Ｉ相酶代谢激活后呈现致癌性，活化的致癌物可被ＩＩ相酶解毒。机体对食管南京医科人学硕Ｌ学位论文癌的易感性可能与前致癌物的激活和解毒代谢失衡有关。编码Ｉ相酶类的基凶主要有乙醇脱氢酶（ＡＤＨ）基因，细胞色素Ｐ４５０（ＣＹＰ）基因；编码ＩＩ相酶类的基因有乙醛脱氢酶（ＡＬＤＨ）基因，谷胱甘肽ｓ．转移酶（ＧｓＴ）基因，Ｎ．乙酰转移酶（ＮＡＴ）基凶。１．１ｌ相酶类基因ＣＹＰ基因１．１．１人体９５％的Ｉ相酶是由细胞色索Ｐ４５０（ＣＹＰ）基因所编码的酶系所组成，ＣＹＰ４５０基因家族包括许多成员，与食管癌易感性相关的主要有ＣＹＰｌＡｌ和ＣＹＰ２Ｅ１。ＣＹＰ２Ｅ１基因定位于人类染色体１０ｑ２４．３，长１１．４ｋｂ，含９个外显子。ＣＹＰ２Ｅ１编码二甲基亚硝胺Ｄ一脱甲基酶，该酶由乙醇诱导催化醛的氧化生成，是参与亚硝胺及其前体物和低分子量卤代烃类化合物在体内代谢的主要酶类。其编码蛋白序列存在６个性酶切位点，即ＴａｑＩ，ＤｒａＩ，Ｒｓａｌ和ＭｓｐＩ位点以及５、端非编码区的ＲｓａＩ和ＰｓｔＩ位点。但是只有位于第６内含子的Ｄｒａｌ和５、端非编码区的ＲｓａＩ／Ｐｓｔｌ位点的多态性影响ＣＹＰ２Ｅ１的表达。ＣＹＰ２Ｅ１的ＤｒａＩ的多态与肺癌的易感性有关，但与食管癌的关系却未见报道。在ＣＹＰ２Ｅ１基因的５、端非编码区，ＲｓａＩ／ＰｓｔＩ多态成完全连锁不平衡性。Ｌｉｎ等人的研究发现，变异基因型（Ｃ１１Ｃ２和Ｃ２／Ｃ２）在食管癌患者和正常对照组中的频率分别为２０．０％和５６．０％。携带ＣＹＰ２Ｅ１ＣＩ／Ｃ１基因型者患食管癌的可能性为其他人的４～６倍‘”。Ｔａｎ等人的研究也得出类似的结论【２］。南京医科大学坝｜学位论文ＣＹＰｌＡｌ基因编码芳烃羟化酶（ＡＨＨ），主要参与致癌物多环芳烃类化合物的代谢。现在四种ＣＹＰｌＡＩ的多态性已被发现。ＣＹＰｌＡｌｍｌ是３、端非编码区发生Ｔ到Ｃ的点突变，酶的催化能力因而得以相应的提高。ＣＹＰＩＡｌｍ２是在第７外显子发生Ａ到Ｇ的转换，从而增加其微粒体酶的活性。ＣＹＰＩＡｌｍ３是发生在第７内含子的突变，这种突变在美国黑人中可见，但在其他种族中罕见。ＣＹＰｌＡｌｍ４是发生在ｍ２位点上游２个碱基处的点突变，但这种变化对酶活性的影响现在还不得而知。对于ＣＹＰｌＡｌ的多态性现在研究较多的是ＣＹＰｌＡｌｍ２基因型。Ｗａｎｇ等研究证实基因型ＣＹＰｌＡｌｌｌｅ／Ｉｌｅ，Ｉｌｅ／Ｖａｌ和Ｖａｌ／Ｖａｌ在病历和对照组中的频率分别为１９．７％，４５．７％，３４．６％和３０．７％，４７．５％，２１．８％。表明携带ＣＹＰｌＡｌＶａｌ／Ｖａｌ基因型的个体患食管癌的危险性更高｛３１。Ｎｉｍｕｒａ等人的研究也证实，ＣＹＰＩＡｌＶａｌ／Ｖａｌ基因型的患者更易患食管癌，如果伴有重度吸烟其食管癌的危险性叮进一步提高１４ｌ。但日本的一研究结果表明食管癌的易感性与ＣＹＰ２Ｅ１和ＣＹＰＩＡｌ的多态性无＿关【５１。这种结果产生的原因还不清楚，也许与种族的差异有关。１．１．２ＡＤＨ基因ＡＤＨ基因位于人类染色体４ｑ２１氆，常见的主要有５种，即ＡＤＨｌ－５。现已发现ＡＤＨ２和ＡＤＨ３存在基因多态现象，与食管癌易感性相关的是ＡＤＨ２基因的多态性。在ＡＤＨ２位点存在ＡＤＨ２＊１，ＡＤＨ２４２和ＡＤＨ２＊３三种等位基因。ＡＤＨ２＊Ｉ为野生型等位基因，其第３外显子发生Ｇ１４３Ａ点突变后形成ＡＤＨ２＊２；ＡＤＨ２＊３则是ＡＤＨ２＊１第９外显子南京医科大学项ｌ。学位论文发生Ｔ１１０７Ｃ点突变所致。ＡＤＨ２＊Ｉ发生点突变形成ＡＤＨ２＊２和ＡＤＨ２＊３后，在这两个突变型等位基因中分别形成ＡＤＨＭａｅｌＩＩ和ＡｌｕＩ的酶切位点。ＡＤＨ２＊３这种等位基因在东亚人中很低，小于５％。因此ＡＤＨ２的研究主要涉及ＡＤＨ２＊Ｉ和ＡＤＨ２＊２两种等位基因。野生型的ＡＤＨ２＊Ｉ是无活性的，而突变型ＡＤＨ２＊２则有活性。对乙醇代谢酶基因多态与日本人食管痛研究显示，食管磷癌患者中基因型ＡＤＨ２＊Ｉ／＊Ｉ的频率明显高于健康对照组，而且具有ＡＤＨ２＊Ｉ／＊Ｉ和ＡＬＤＨ２＊Ｉ／＊２联合基因型的个体发生食管磷癌的危险性更高，ＯＲ值可达１７．９…１。１．２１．２．１ＩＩ相酶基因ＧＳＴ基因ＧＳＴ基凶编码产物是由肽链组成的二聚体，可催化致癌原与谷胱甘）ＩｔｆＨｑ的结合反应，从而使致癌原解毒。除此之外，ＧＳＴ还具有对其他酶或蛋白的调节作用，参与ＤＮＡ的修复。人细胞浆内ＧＳＴ同工酶丰耍有４类，还有一类微粒体ＧＳＴ。ＧＳＴ中以ＧＳＴＭｌ、ＧＳＴＴｌ、ＧＳＴＰＩ对机体最重要，各种研究也较多。ＧＳＴＭｌ主要作用于致癌物如ＰＡＨ、乙烯环氧化物、苯乙烯等的中间代谢产物进行代谢；而ＧＳＴＴｌ是参与卤代甲烷生物转化的主要酶；ＧＳＴＰｌ则参与代谢烟草中的致癌物。ＧＳＴＭｌ和ＧＳＴＴｌ在特性方面较为类似，如果他们发生碱基的缺失突变，则失去酶的活性。ＧＳＴＭｌ位于人类染色体１Ｐ¨３，它有三种等位基因，一种为缺失突变型，另两种ＧＳＴＭｌａ和ＧＳＴＭｌｂ，区别在于５３４碱基位置发生Ｃ到Ｇ的替换，ＧＳＴＭｌａ和ＧＳＴＭｌｂ在功能上没有差别‘７１。ＧＳＴＴｌ位于人类染色体２２ｑ１１２，南京医科大学砸上学位论叟它有两种，一种是有功能的，另一种则无功能，发生同源缺失的ＧＳＴＴＩ无酶活性。ＧＳＴＰｌ基因也有三种等位基因，ＧＳＴＰｌ＊Ａ为野生型；ＧＳＴＰｌ＋Ｂ则是在第５外显子的３１３位碱基处发生Ａ到Ｇ的替换，；ＧＳＴＰｌｔＣ则是在３４１位碱基处发生Ｃ到Ｔ的改变。这些变异使得ＧＳＴＰｌ８Ｂ和ＧＳＴＰｌ＋Ｃ基因性对多种底物的催化活性降低，但ＧＳＴＰＩ变异基因型也会产生对某些底物催化活性的增高。如ＨＵ等发现ＧＳＴＰｌ＋Ｂ基因型较之于ＧＳＴＰｌ＋Ａ基因型对苯并芘的催化活性要高１８１。许多研究发现ＧＳＴ基因的多态性于食管癌的易感性有关，但结论却不尽相同。Ｒｏｔｈ等研究发现在中国食管癌高发地区林县，ＧＳＴＭＩ缺失基因型更易发生食管的不典型增生吲。Ｔａｎ等人也认为ＧＳＴＭＩ的多态性与食管癌的易感性有关，而ＧＳＴＴｌ和ＧＳＴＰｌ则与食管癌的易感性无关Ⅲ。林东听等人的研究结果则表明ＧＳＴＭＩ或ＧＳＴＴＩ基凶多态性单独似乎与食管癌危险性无关，但两者阳性基因型联合可能是食管癌的危险因素‘１０】。Ｌｅｅ等人发现在ＧＳＴＰｌＩｌｅ／Ｉｌｅ型的吸烟人群中有较高的食管磷癌发生的危险性‘１１１。ＶａｎＬｉｅｓｈｏｕｔ等人研究表明ＧＳＴＰｌ＋Ｂ基因型与Ｂａｒｒｅｔｔ食管及食管腺癌的发生有关，而ＧＳＴＭｌ和ＧＳＴＴｌ则与此无关［１２１。１．２．２ＡＬＤＨ基因迄今发现的ＡＬＤＨ同工酶有１２种之多，常见的有４种，分别由定位于不同染色体的４个基因编码。定位于１２号染色体的ＡＬＤＨ２编码乙醛的主要代谢酶，与６０％以上的乙醛代谢有关。ＡＬＤＨ２＋１为南京医科人学顾Ｌ学位论文野，Ｉｊ型等位基因，在其第１２外显子发生Ｇ１５１０Ａ点突变后，形成ＡＬＤＨ２＋２。ＡＬＤＨ２。２酶的活性大大降低。日本的许多研究表明食管癌的易感性与ＡＬＤＨ的多态性有关。活性减低的ＡＬＤＨ２＊１／＇２基因型在食管癌中的频率为５２．８％【”Ｊ。与不携带ＡＬＤＨ２＊２者相比，ＡＬＤＨ２＊２的饮酒者更易发￡ｌ！食管癌，在ＡＬＤＨ２＊２的酗酒者巾发牛食管癌的危险性（ＯＲ）可达４９．６，而携带ＡＬＤＨ２＊１／＊１酗酒者的ＯＲ值仅为７．８４ｔ”】，Ｙｏｋｏｙａｍａ等也报道ＡＬＤＨ２＊２与饮酒有协同致癌作用‘１４。。１．２．３ＮＡＴ基因ＮＡＴ基凶位于人类染色体８Ｐ２２，构成由８７０个碱基对组成的不含内含子的开放式阅读框架，编码２９０个氨基酸。由ＮＡＴ基因编码的酶有ＮＡＴｌ和ＮＡＴ２两种，它们有８７％的核苷酸是同源的。ＮＡＴ２＊４被认为是野生型等位基因，但它在许多种族中并非最常见。ＮＡＴ２基因如发生Ｇ１９１Ａ、Ｔ３４１Ｃ、Ａ４３４Ｃ、Ｇ５９０Ａ、Ｇ８５７Ａ碱基的替换，则产牛慢乙酰化基因型表达产物，催化活性较野生型降低，这些基因型在不同种族中存在明显差异。ＮＡＴｌ＋４是野生型等位基因，普遍存在于所有人群，当然也存在种族差异。吸烟和烹饪时都可产生多种芳香胺和杂环胺，它们可以增加机体的致癌性。ＮＡＴｌ和ＮＡＴ２的作用就是通过对芳香胺或杂环胺的。位或Ｎ位乙酰化使其对人体失去致癌性。ＮＡＴｌ和ＮＡＴ２的变异型会影响体内芳香胺及杂环胺的代谢，引起对食管癌易感性增加，Ｍｏｒｉｔａ等人对日本的６６名食管癌患者及１６４南京医科夫学碗一Ｌ学位论文名健康人所做的病例对照研究，结果发现ＮＡＴ２的中、慢乙酰化基因型在病例和对照组中的频率分别为３８％、１５％和３０％、１８％，表明ＮＡＴ２基因的多态性与食管癌的易感性有关‘”】。２．与］ＤＮＡ稳定性有关的基因２．１ＭＴＨＦＲ基因亚甲基四氢叶酸还原酶（Ｍ唧Ｒ）催化亚甲基四氢叶酸转化为四氢叶酸，同时使高半胱氨酸甲基化形成蛋氨酸，蛋氨酸进一步可转化为Ｓ一腺苷甲硫氨酸（ＳＡＭ）。现己发现两种ＭＴＩ－ＬＦＲ基因的多态性，分别是Ｃ６７７Ｔ和Ａ１２９８Ｃ。６７７ＴＴ变异型酶的活性仅为野生型６７７ＣＣ活性的３０％【１６］。该基因型的个体伴有血浆高半胱氨酸水平的增高和ＭＴＨＦＲ活性的减低。另一种常见的ＭＴＨＦＲ基因的多态性是在１２９８位碱基发生Ａ到ｃ的改变，这种变异也会减低酶的活性和增高血浆高半胱氨酸的水平，只是程度较６７７ＴＴ变异型有所降低而已。对于ＭＴＨＦＲ基因的多态性与食管癌的关系，Ｃｈｕｎ等研究也表明，ＭＴＨＦＲ的多态性与国人食管癌的易感性有关。６７７ＴＴ基因型的个体发生食管磷癌的危险性是６７７ＣＣ基因型个体的６倍多。１２９８ＣＣ基因型个体也较１２９８ＡＡ基因型个体易患食管癌，但１２９８ＣＣ基因型在病例和对照组中频率都较底，分别为２．９％和１．４％Ｉ”】。２．２ＸＲＣＣＩ基因ＸＲＣＣｌ是一种重要的ＤＮＡ修复基因，位于人类染色体１９ｑ１３２Ｊ３３，其Ｎ末端结构域可以与ＤＮＡ聚合酶Ｂ亚单位相互作用；南京医科大学硕上学位论文ｃ末端结构域与ＤＮＡ连接酶ｌＩＩ相互影响；中段结构域则町以与ＰＡＲＰ相互影响。ＸＲＣＣｌ和它们一起进行ＤＮＡ单链断裂修复和碱基切除修复。目前已发现ＸＲＣＣｌ基因编码区有３个单链核苷酸多态位点，会导致其蛋白质相应的氨基酸的改变，它们分别是Ｃ２６３０４Ｔ（Ａｒ９１９４Ｔｒｐ）、Ｇ２７４６６Ａ（Ａｒ９２８０Ｈｉｓ）和Ｇ２８１５２Ａ（Ａｒ９３９９Ｇｌｎ）。这些变异都可能影响到ＸＲＣＣＩ酶的活性。食管癌细胞中有许多染色体改变和痛基因及抑癌基因突变，说明致癌因素引起的ＤＮＡ损伤是食管痛发生发展的重要事件，同时提示ＤＮＡ修复能力的差异可能是导致个体对食管癌易感性不同的原因。Ｌｅｅ等人研究表明，携带ＸＲＣＣｔＡｒｇ／Ｇｌｎ基因型的饮涌者患食管癌的风险性大大增加‘１８］；Ｘｉｎｇ等人则认为ＸＲＣＣｌ基因的Ａｒ９１９４Ｔｒｐ多态性与食管癌的易感性有关，Ａｒ９３９９Ｇｌｎ的多态性与食管癌无关‘四１。２．３ＨＯＧＧｌ基因在ＤＮＡ氧化损伤中，８一羟基鸟嘌呤形成频率最高，致突变能力最强，这种氧化损伤与肿瘤的发生发展有密切关系。ＨＯＧＧｌ基因位于人类染色体３Ｐ２５‘２６区域内，整个基因由７个外显子和６个内含子组成。其基冈产物有ＤＮＡ糖苷酶和ＡＰ裂解酶活性，可特异切除修复８一羟基鸟嘌呤、自发碱基丢失以及因ＤＮＡ糖苷化作用产生的阻断ＤＮＡ复制的ＡＰ位点。对鼠的ＨＯＧＧｌ酶研究发现９５％以上的碱基切除修复是由该酶完成的。研究发现ＨＯＧＧｌ基因具有遗传多态性，其中第７外显子第１２４５位碱基Ｃ／Ｇ多态，使３２６位密码子发生Ｓｅｒ到Ｃｙｓ的转变。体外实验发现ＨＯＧＧｌ—３２６Ｃｙｓ基因型蛋白修复８一羟南京医科大学硕＿ｌ学位造文基鸟嘿呤的活性显著低于３２６Ｓｅｒ蛋白，提示携带３２６Ｃｙｓ等位基因的个体可能有修复能力低下或缺陷，因而易患肿瘤。ＨＯＧＧｌ基因涉及８．羟基鸟嘌呤的切除修复，因此该基因多态会引起个体对ＤＮＡ氧化损伤修复能力的差异，可能与食管癌的遗传易感性有关。Ｘｉｎｇ等人的研究证实了ＨＯＧＧｌ基因的多态性与食管痛易感性有关幽Ｉ。另外Ｒａｊａ等研究表明携带ＨＯＧＧｌ基因变异型的Ｂａｒｒｅｔｔ食管患者易于发生不典型增生‘２１１。３．抑癌基因与食管癌的易感性３．１Ｐ５３基因Ｐ５３基因在细胞内的中心作用是介导ＤＮＡ损伤后的应急反应，避免受损ＤＮＡ的堆积，维持遗传的稳定性。Ｐ５３位于人类染色体１７Ｐ１３１包含１１个外显子，人的Ｐ５３编码产物由３９３个氨基酸组成。目前发现的Ｐ５３基因的点突变至少有３５００种，这些基因突变在食管癌多发生在５、６、７、８外显子，与食管癌的发生发展有密切关系，但尚未发现其与食管癌的易感性有关。Ｌｅｅ等人‘１２ｌ及张蕾等人【２２１的研究表明Ｐ５３基阕７２位密码子的多态与食管癌易感性有关。Ｐ５３基因第７２密码子具有ＣＧＴ／ＣＣＴ单核苷酸多态性，使编码的精氨酸被脯氨酸取代。虽然含Ａｒｇ和Ｐｒｏ的两种Ｐ５３均为野生型，在大多数细胞中二者的稳定性牛日同，但两种蛋白的转录激活作用、抑制转化细胞生长和诱导细胞调亡的能力有所不同。Ｐｒｏ型Ｐ５３似乎能更有效的激活转录，从而使许多下游基因表达上调；然而Ｐｒｏ型Ｐ５３抑制转化细胞生长和诱导细胞调亡的能力较Ａｒｇ型弱。后一种机理有可能是Ｐｒｏ等位基因与某南京医科大学颂｝一学位论文些癌症易感性增高相关的原凶。杂合子Ａｒｇ／Ｐｒｏ基因型并不增加食管痛的风险，只有当两个等位基冈都是多态时才与食管癌风险增高有关，提示Ｐｒｏ等位基因在食管癌的发生中很可能起隐性作用阻］。此外与食管癌易感性相关的基因还有ＭＰＯ基因，Ｌ—ＭＹＣ基冈、ＴＯＣ基因、ＭＧＭＴ基网和ＲＢ基冈。４．结束语综上所述，基因多态性与食管癌的易感性的关系在医学研究领域受到逐渐关注，且目前该领域研究已取得了一定成果。通过对这些易感基因的研究有利于全面阐明食管癌发生的遗传机制、对食管癌患者危险性进行准确评估，以便对甲期发现及预防治疗提供理论基础。南京医科犬学硕士学位论殳参考文献：１．ＬｉｎＤＸ，ＴａｎｇＹＭ，ＰｅｎｇＱ，ｅｔａ１．ＣａｎｃｅｒＥｐｉｄｅｍｉｏｌＢｉｏｍａｒｋｅｒｓＰｒｅｖ，１９９８；７（１１）：１０１３一１０１８２．ＴａｎＷｊＳｏｎｇＮ，ＷａｎｇＧＱ，ｅｔａ１．ＣａｎｃｅｒＥｐｉｄｅｍｉｏｌＢｉｏｍａｒｋｅｒｓＰｒｅｙ，２０００；９（６）：５５１—５５６．３．ＷａｎｇＡｌｌ，Ｓｕｎ８（１）：４９－５３．４．ＮｉｍｕｒａＣＳ，ＬｉＬＳ，ｅｔａ１．ＷｏｒｌｄＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００２；Ｙ，Ｙｏｋｏｙａｍａｓ，ＦｕｊｉｍｏｒｉＭ，ｅｔａ１．Ｃａｎｃｅｒ，１９９７；８０（５）：８５２—８５７．５．ＭｏｒｉｔａＳ，ＹａｎｏＭ，Ｓｈｉｏｚａｋｉ７１（２）：１９２—１９５．６．ＨｏｒｉＨ，ｅｔａ１．ＩｎｔＪＣａｎｃｅｒ，１９９７；Ｈ，ＫａｗａｍｏＴ，ＥｎｄｏＭ，ｅｔａ１．ＪＣｌｉｎＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，１９９７；２５（４）：５６８—５７５．７．ＨｅｎｇｓｔｌｅｒＪ，Ａｒａｎｄ１９９８；１８．ＯｐｈｎｉｓＭ，ＨｅｒｒｅｒｏＭＥ，ｅｔａ１．ＲｅｃｅｎｔＲｅｓｕｌｔＣａｎｃｅｒＲｅｓ，５４（１）：４６—８５，Ｍ，Ｍｕｋｄｅｒ正Ｐｅｔｅｒｓ孵ｅｔａ１．Ｃａｎｃｅｒ，１９９８；８２（１２）：２４３４—２４３８．９．ＲｏｔｈＭＪ，ＤａｗｓｅｙＳＭ，ＷａｎｇＧｅｔａ１．Ｃａｎｃｅｒｌｅｔｔ，２０００；１５６（１）：７３—８１１０．林东昕、唐东明、陆士新等。中国流行病学杂志，１９９８；１９（４）：１９５．１９９。１１．ＶａｎＬｉｅｓｈｏｕｔＥＭ，ＲｏｅｌｏｆｓＨＭ，ＤｅｋｋｅｒＳ，ｅｔａ１．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，１９９９；５９（３）：５８６—５８９．５７南京医科大学硕｝学位论文１２．ＬｅｅＪＭ，ＬｅｅＹＣ，＇ｇａｎｇｓＹ，ｅｔａ１．ＩｎｔＪＣａｎｃｅｇ２０００；８９（５）：４５８—４６４１３．ＫｅｉｔｏｒｏＭ，ＮｏｕｙｕｋｉＨ，ＭｏｓａｙｕｋｉＳ，ｅｔａ１．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｓｉｓ，２００１；２２（６）：９１３－９１６．１４．ＹｏｋｏｙａｍａＡ，ＭｕｒａｍｔａｓｕＴ，ＯｍｏｒｉＴ，ｅｔａ１．ＡｌｃｏｈｏｌＣｌｉｎＥｘｐＲｅｓ，Ｉ９９９２３（５）：１７０５—１７】０．１５．ＭｏｒｉｔａＳ，ＹａｎｏＭ，ＴｓｕｊｉｎａｋａＴ，ｅｔａ１．ＩｎｔＪＣａｎｃｅｒ，１９９８；７９（５）：５１７－５２０．１６．ＦｒｏｓｓｔＰ’ＢｌｏｍＨＪ，ＭｉｌｏｓＲ，ｅｔａ１．ＮａｔＧｅｎｅｔ，１９９５；１０（１）：１１１－１１３．ａｌ，ＣａｎｃｅｒＴ，ｅｔＸ，ＷｅｎＳ，Ｄｅｙｉｎ１７。Ｃｈｕｎｙｉｎｇ３２７５．１８．ＬｅｅＲｅｓ，２００１，６１（８）：３２７２—ＪＭ，ＬｅｅＹＣ，ＹａｎｇＳＹ，ｅｔａ１．ＩｍＪＣａｎｃｅｒ，２００１，９５（４）：２４０—２４６．ＪＣａｎｃｅｒ＇２００２；１００（５）：６００－６０５，ａ１．ＩｎｔＸ，ｅｔＪ，Ｍｉａｏ１９．ＸｉｎｇＤ，Ｑｉ２０．ＸｉｎｇＤＹ，ＴａｎＷ，ＳｏｎｇＮ，ｅｔａ１．ＩｎｔＪＣａｎｃｅｒ，２００１；９５（３）：１４０－１４３・２１．ＲａｊａＳ，ＦｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎＳＤ，ＢａｋｓｈＦＫ，ｅｔａ１．ＡｎｎＴｈｏｒａｃＳｕｒｇ，２００１；７２（４）：１１３０—１１３５．２２．张蕾、刑德印、何祖根等。中华医学遗传学杂志，２００２；１９（１）：１０—１４．